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マーカー遺伝子導入による癌微小転移形成過程の解析と診断法開発への応用

研究課題

研究課題/領域番号 11670236
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 実験病理学
研究機関愛知県がんセンター

研究代表者

中西 速夫  愛知県がんセンター, 腫瘍病理学部, 室長 (20207830)

研究分担者 池原 譲  愛知県がんセンター, 腫瘍病理学部, 研究員 (10311440)
研究期間 (年度) 1999 – 2001
研究課題ステータス 完了 (2001年度)
配分額 *注記
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2001年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
2000年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
1999年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
キーワードGFP遺伝子 / リアルタイム解析 / 胃癌 / 血行性転移 / 腹膜転移 / 微小転移 / インテグリン / マーカー遺伝子 / GFP / リアルタイムPCR / 腹腔洗浄細胞診 / 転移モデル / ルアルタイムPCR
研究概要

本研究ではマーカー遺伝子導入により血行性転移および腹膜転移の微小転移モデルを作成し,微小転移のin vivoにおける実態とそのダイナミズムをリアルタイムに解析した。血行性転移に関しては平成11年度にGFP遺伝子導入ラット舌癌転移モデルを作成し,Intravital videomicroscopy (IVVM)法と組み合わせてin vivoにおけるリアルタイム解析法を確立、肝転移初期過程を解析した。その結果、高・低転移性細胞の転移能の違いは類洞内皮への初期定着ではなく、主としてインテグリンα5を介した内皮下基底膜への安定した接着の違いに起因することを明らかにした。また平成12年度、13年度には各々ヒト胃癌細胞株(GCIY、MKN28)および大腸癌細胞株(COLM-5)へのGFP遺伝子導入による腹膜微小転移モデルを作成し、腹膜転移の初期過程のin vivo解析を行った。その結果、腹膜転移には大網に限局して初期転移巣を形成する型と大網と壁側腹膜の両方に初期から転移する型の2種類が存在することを明らかにした。単層中皮細胞培養系を用いたin vitroの実験から両者の違いは中皮細胞への接着性ではなく、中皮細胞下のフィブロネクチンを主成分とするマトリックスへの接着性の違いに起因する可能性を示した。内皮細胞を可視化できるトランスジェニックマウスの作出に関する予備的検討として計画した内皮細胞特異的遺伝子をプロモーターとし、GFPをリポーターとする発現ベクターの構築に関しては現在継続して行っている.
また微小転移研究の臨床応用として胃癌患者の腹膜微小転移を高感度に検出できる定量的リアルタイムRT-PCR法を平成11-12年度にかけて確立した.平成13年度には胃癌腹膜再発のリスク評価に対する本法の意義を確認するためProspective study(厚生労働省から認定を受けた高度先進医療として)を行い、約50症例の収集を行い、細胞診に比べ感度が高く腹膜再発のハイリスク症例の選別に有用であることを示す結果を得た。

報告書

(4件)
  • 2001 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2000 実績報告書
  • 1999 実績報告書
  • 研究成果

    (35件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (35件)

  • [文献書誌] Kodera, Y., Nakanishi, H., et al.: "Quantitative detection of disseminated free cancer cells in peritoneal washes with real-time RT-PCR : A sensitive predictor of outcome for gastric carcinoma patients"Ann.Surg.. (in press). (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Munesue, S., Nakanishi, H., et al.: "The role of Syndecan 2 in regulation of actin-cytoskeletal organization of Lewis lung carcinoma-derived metastatic clones"Biochem.J.. 362(in press). (2002)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Inoue, T., Nakanishi, H., et al.: "Real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction of urinary cytokeratin 20 detects transitional cell carcinoma cells"J.Urol.. 166・6. 2134-2141 (2001)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ito, S., Nakanishi, H., et al.: "Real-time observation of micrometastasis formation in the living mouse liver using a GFP-tagged rat tongue carcinoma cell line"Int.J.Cancer. 93・2. 212-217 (2001)

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  • [文献書誌] Ogawa, K., Nakanishi, H., et al.: "Establishment of rat hepatocellular carcinoma cell lines with differing metastaticpotential in nude mice"Int.J.Cancer. 91・6. 797-802 (2001)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 中西速夫, 伊藤誠二, 立松正衛: "Green fluorescent protein遺伝子導入による転移過程のリアルタイム解析"Surgery Frontier. 8・2. 8-12 (2001)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakanishi, H., Kodera, Y., et al.: "Rapid quantitative detection of free cancer cells in the parkoneal cavity of gastric cancer patients with real-time CEA RT-PCR using hybridization probes.In "Rapid cycle real-times PCR : Methods and applications.Genetics and Oncology.ads Dermaler/Wittwer/Slva subramanian"Springer-Verlag.Heidelberg (in press). (2002)

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  • [文献書誌] Nakanishi, H., Abe, A., Inada, K., et al: "Induction of apoptosis in cancer xenografts in nude mice and reduction of circulating tumor cells in blood by 5-FU and 1-hexylcarbamoyl-5-fluorouracil (HCFU)"Cancer Res. Clin. Oncol.. 125. 660-668 (1999)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakanishi, H., Kobayashi, K., Nishimura, T., et al: "Chemosensitivity of micrometastases and circulating tumor cells to uracil and tegafur as evaluated using LacZ gene-tagged Lewis lung carcinoma cell"Cancer Lett.. 142. 31-41 (1999)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakanishi, H., Kodera, Y., Yamamujra, Y., et al: "Molecular diagnostic detection of free cancer cells in the peritoneal cavity of patients with gastrointestinal and gynecologic malignancies"Cancer Chemother Pharmacol. 43. S32-S36 (1999)

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  • [文献書誌] Ikehara, Y., Shimizu, N., Nakanishi, H., et al: "A novel glycosyltransterase with a polyglutamine repeat ; a new candidate for Gdl α synthase (ST6GalNAc V)"FEBS Lett.. 463. 92-96 (1999)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakanishi, H., Kodera, Y., Yamamura, Y., et al: "Rapid quantitative detection of carcinoembryonic antigen-expressing free tumor cells in the peritoneal cavity of gastric cancer patients with real-time RT-PCR on the LightCycler"Int. J. Cancer. 89. 411-417 (2000)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Takeuchi, S., Nakanishi, H., Yoshida, K., et al: "Isolation of differentiated squamous and undifferentiated spindle carcinoma cell lines with differing metastatic potential from a 4-nitroquinoline N-oxide-induced tongue carcinoma in a F344 rat"Jpn. J. Cancer Res.. 91. 1211-1221 (2000)

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  • [文献書誌] Ito, S., Nakanishi, H., Tatematsu, M., et al: "Real-time observation of micrometastatis formation in the living mouse liver using a GFP-tagged rat tongue carcinoma cell line"Int. J. Cancedr. 93. 212-217 (2001)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Raimundas, L., Nakanishi, H., Ito, S., et al: "Clinicopathological significance of fibrotic capsule formation around liver metastasis from colorectal cancer"J. Cancer Res. Clin. Oncol.. 127. 193-199 (2001)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Inoue, T., Nakanishi, H., Inada, K., et al: "Real-time reveerse transcriptase polymerase chain reaction of urinary cytokeratin 20 detects transitional cellcarcinoma cells"J. Urol.. 166(&). 2134-41 (2001)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ogawa, K., Nakanishi, H., Takeshita, F., et al: "Establishment of rat hepatocellular carcinoma cell lines with differing metastaticpotential in nude mice"Int. J. Cancer. 91(6). 797-802 (2001)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Tsukamoto, T., Fukami, H., Nakanishi, H., et al: "Hexosaminidase-altered aberrant crypts, carrying decreased hexosaminidase α and β subunit mRNA, in colon of 1,2-dimethylhydrazine-treated rats"Jpn. J. Cancer Res.. 92. 109-118 (2001)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ando, S., Gohara, R., Nakanishi, H., et al: "Measurement of protein tyrosine phosphatase activity using as substrates synthetic phosphotyrosine-containing peptides"Res. Communi. Biochem. Cell. Mol. Biol.. 5(1&2). 75-84 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kodera, Y., Nakanishi, H., et al.: "Quantitative detection of disseminated free cancer cells in peritoneal washes with real-time RT-PCR : A sensitive predictor of outcome for gastric carcinoma patients"Ann.Surg.. (in press). (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Munesue, S., Nakanishi, H., et al.: "The role of syndecan 2 in regulation of actin-cytoskeletal organization of Lewis lung carcinoma-derived metastatic clones"Biochem.J.. 362(in press). (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Inoue, T., Nakanishi, H., et al.: "Real-time reverse transcriptase polymerase chain reaction of urinary cytokeratin 20 detects transitional cell carcinoma cells"J.Urol.. 166・6. 2134-2141 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Ito, S., Nakanishi, H., et al.: "Real-time observation of micrometastasis formation in the living mouse liver using a GFP-tagged rat tongue carcinoma cell line"Int.J.Cancer. 93・2. 212-217 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Ogawa, K., Nakanishi, H., et al.: "Establishment of rat hepatocellular carcinoma cell lines with differing metastaticpotential in nude mice"Int.J.Cancer. 91・6. 797-802 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] 中西速夫, 伊藤誠二, 立松正衞: "Green fluorescent protein遺伝子導入による転移過程のリアルタイム解析"Surgery Frontier. 8・2. 8-12 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Nakanishi, H., Kodera, Y., et al.: "Rapid quantitative detection of free cancer cells in the peritoneal cavity of gastric cancer patients with real-time CEA RT-PCR using hybridization probes in Rapid cycle real-time PCR : Method and applications. Genetics and Oncology, eds. Dietmaier /Wittwer /Siva subramanian"Springer-Verlag. Heidelberg (in press). (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Ito,S.: "Real-time observation of micrometastasis formation in the living mouse liver using a GFP-tagged rat tongue'carcinoma cell line."Int J Cancer. (in press). (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Raimundas,L.: "Clinicopathological significance of fibrotic capsule formation around liver metastasis from colorectal cancer."J.Cancer Res.Clin.Oncol.. 127. 193-199 (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Nakanishi,H.: "Rapid quantitative detection of carcinoembryonic antigen-expressing free tumor cells in the peritonea cavity of gastric cancer patients with real-time RT-PCR on the LightCycler."Int.J.Cancer. 89. 411-417 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Takeuchi,S.: "Isolation of differentiated squamous and undifferentiated spindle carcinoma cell lines with differing metastatic potential from a 4-nitroquinoline N-oxide-induced tongue carcinoma in a F344 rat."Jpn.J.Cancer Res.. 91. 1211-1221 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Shimizu,N.: "Eradication diminishes enhancing effects of Helicobocter pylori infection on glandular stomach carcinogenesis in Mongolian gerbils."Cancer Res.. 60. 1512-1514 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Nakanishi, H., Kodera, Y. et al.: "Molecular diagnostic detection of free cancer cells in the peritoneal cavity of patients with gastrointestinal and gynecologic malignancies"Cancer Chemother Pharmacol. 43. S32-S36 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Nakanishi, H., Kobayashi, K. et al.: "Chemosensitivity of micrometastases and circulating tumor cells to uracil and tegatur as evaluated using LacZ gene-tagged Lewis lung carcinama cell"Cancer Letters. 142. 31-41 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Nakanishi, H., Abe A. et al.: "Induction of apoptosis in metastatic foci from human gastric cancer xenografts in nademice and reduction of circulating tumor cells in blood by 5-FU and 1-hexylcarbamoly-5-thorauracil (HCFU)"J. Cancer Res. Clin. Oncol.. 125. 660-668 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] 中西速夫、立松正衛: "RT-PCR法による腹腔内遊離癌細胞の検出"医学のあゆみ. 192(4). 273-276 (2000)

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      1999 実績報告書

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公開日: 1999-04-01   更新日: 2016-04-21  

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