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細菌内毒素による細胞活性化に関与する膜タンパク質の同定とその機能解析

研究課題

研究課題/領域番号 11670270
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 細菌学(含真菌学)
研究機関国立国際医療センター(研究所)

研究代表者

切替 照雄  国立国際医療センター研究所, 感染・熱帯病研究部, 部長 (50192563)

研究期間 (年度) 1999 – 2000
研究課題ステータス 完了 (2000年度)
配分額 *注記
3,500千円 (直接経費: 3,500千円)
2000年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
1999年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
キーワードLPS / Lipopolysaccharide / 内毒素 / リピドA / マクロファージ / PE-406 / PE-506 / 骨髄ストローマ細胞 / Lipoplysaccharide / LPS結合タンパク質 / タキソール
研究概要

細菌内毒素(LPS)は、マクロファージなどの宿主細胞を活性化し種々のサイトカインを産生することが知られている。本研究の目的は、LPSによる細胞活性化の要となっている新たな分子を同定しその特性を明らかにすることである。本研究では、細胞膜タンパク質に対する抗体およびラジオアイソトープ標識リピドAを用いて解析することで、これらの基準の多くを満足するタンパク質を同定した。これまで、マウス骨髄ストローマ細胞株ST2がCD14の発現はなく、マクロファージとほぼ同程度のLPS反応性を有することを明らかにしている。そこで、ST2細胞から精製した細胞膜およびこの細胞膜よりHPLCで部分精製したLPS結合タンパク質を抗原としてポリクロナール抗体を作製した。
この抗ST2細胞膜抗体をもちいたマクロファージ膜タンパク質の解析した。ST2細胞を可溶化し作成した抗体を用い免疫沈降することで膜タンパク質を濃縮し、これを電気泳動で分離後、さらに同じ抗体でウェスタンブロットする。これによって特定の集団の膜タンパク質の発現が可能になった。[3H]標識リピドA前駆体(PE-406)および[3H]標識リピドA(PE-506)を用いたリガンドブロット法でリピドA結合タンパク質として57kDaおよび53kDaのタンパク質を同定した。

報告書

(3件)
  • 2000 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1999 実績報告書
  • 研究成果

    (40件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (40件)

  • [文献書誌] Kirikae,T.,Kirikae,F.,Iwai,H.,Qureshi,N.,Fukase,K., et al.: "LPS-dependent changes in the expression of 57 kDa and 53 kDa cell membrane proteins without participation of CD14."J.Endotoxin Res.. 5. 62-65 (1999)

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  • [文献書誌] Nakano,M.,Tominaga,K.,Saito,S.,Kirikae,F,,Lin,S, et al.: "Lipopolysaccharide- and paclitaxel (Taxol)- induced tolerance in murine peritoneal macrophages."J.Endotoxin,Res.. 5. 102-106 (1999)

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  • [文献書誌] Hirakata,Y.,Kirikae,T.,Kirikae,F.,Yamaguchi,T., et al.: "Effect of Psudomonas aeruginosa exotoxin A on endotoxin-induced tumor necrosis factor production in murine lung."J.Med.Microbiol.. 48. 471-477 (1999)

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  • [文献書誌] Kirikae,T.,Nitta,T.,Kirikae,F.,Suda,Y., et al.: "Lipopolysaccharides (LPS) of oral black-pigmented bacteria induce tumor necrosis factor production by LPS-refractory C3H/HeJ macrophages in a different way from LPS of Salmonella."Infect.Immun.. 67. 1736-1742 (1999)

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  • [文献書誌] Saito,S.,Matuura,M.,Tominaga,K.,Kirikae,T., et al.: "Important role of membrane-associated CD14 in the induction of IFN-g and subsequent nitric oxide production by murine macrophages in response to bacterial lipopolysaccharide."Eur.J.Biochem.. 267. 37-45 (2000)

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  • [文献書誌] Swierzko,,A.S.,Kirikae,T.,Kirikae,F.,Hirata,M., et al.: "Biological activities of Proteus lipopolysaccharides and their interaction with polymyxin B and a 18-kilodalton cationic antimicrobial protein (CAP18)-derived peptide."J.Med.Microbiol.. 49. 127-138 (2000)

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  • [文献書誌] Akashi,S.,Ogata,H.,Kirikae,F.,Kirikae,T., et al.: "Regulatory roles for CD14 and phosphatidylinositol in the signaling via Toll-like receptor 4-MD-2."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 268. 172-177 (2000)

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  • [文献書誌] Kirikae,T.,Ojima,I.,Fuero-Oderda,C.,Lin,S., et al.: "Structural significance of the acyl group at the C-10 position and the A ring of the taxane core of paclitaxel for inducing nitric oxide and tumor necrosis factor production by murine macrophages."FEBS Lett.. 478. 221-226 (2000)

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  • [文献書誌] Kirikae,T.,Suda,Y.,Tamura,H.,Yamasu,H.,Kirikae,F., et al.: "Protective Effect of OK-432 on Mice against Endotoxemia and Infection with Pseudomonas aeruginosa and Salmonella enteritidis."Jpn.J.Infect.Dis.. 53. 34 (2000)

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  • [文献書誌] Kohmura,Y.,Kirikae,T.,Kirikae,F.,Nakano,M.,Sato,I. et al.: "Onapristone (ZK299) blocks the suppresive effect of progesterone, but not that of dexamethasone, on inducible nitric oxide synthase gene expression and nitric oxide production in murine macrophages."Int.J.Immunopharmaco.. 22. 765-774 (2000)

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  • [文献書誌] Kawano,C.,Muroi,K.,Yoshizaka,M.,Kirikae,T.,Ozawa,K., et al.: "Filamented Pseudomonas aeruginosa and a markedly high level of endotoxin in cerebrospinal fluid."J.Infect.. 41. 114-115 (2000)

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  • [文献書誌] Kohmura,Y.,Kirikae,T.,Kirikae,F.,Nakano,M.,Sato,I et al.: "Lipopolysaccharide (LPS)-induced intra-uterine fetal death (IUFD) in mice is principally due to maternal cause but not fetal sensitivity to LPS."Microbiol.Immunol.. 44. 7897-7904 (2000)

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  • [文献書誌] Kakinuma,N.,Iwai,H.,Takahashi,S.,Hamano,K., et al.: "Quinolactacins A, B and C: novel quinolone compounds from Penicillium sp.EPF-6."J.Antibiot. 53. 1252-1256 (2000)

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  • [文献書誌] Hashimoto,M.,Kirikae,F.,Dohi,T.,Kusumoto,S., et al.: "Structural elucidation of capsular polysaccharide from a clinical isolate of Bacteroides vulgatus from patient with Crohn's disease."Eur.J.Biochem.. (in press).

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  • [文献書誌] Hashimoto,M.,Kirikae,F.Toyooka,K.,Kaneko,A., et al.: "Protective Effect of OK-432 on Mice against Endotoxemia and Infection with Pseudomonas aeruginosa and Salmonella enteritidis."Microbiol.Immunol.. (in press).

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  • [文献書誌] Kirikae, T., Kirikae, F., Iwai, H., Qureshi, N., Fukase, K., et al: "LPS-dependent changes in the expression of 57 kDa and 53 kDa cell membrane proteins without participation of CD14."J.Endotoxin Res. 5. 62-65 (1999)

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  • [文献書誌] "Lipopolysaccharide- and paclitaxel (Taxol)- induced tolerance in murine peritoneal macrophages."J.Endotoxin, Res.. 5. 102-106 (1999)

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  • [文献書誌] Hirakata, Y., Kirikae, T., Kirikae, F., Yamaguchi, T., et al: "Effect of Psudomonas aeruginosa exotoxin A on endotoxin-induced tumor necrosis factor production in murine lung"J.Med. Microbiol.. 48. 471-477 (1999)

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  • [文献書誌] "Lipopolysaccharides (LPS) of oral black-pigmented bacteria induce tumor necrosis factor production by LPS-refractory C3H/Hel macrophages in a different way from LPS of Salmonella"Infect. Immun.. 67. 1736-1742 (1999)

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  • [文献書誌] "Important role of membrane-associated CD14 in the induction of IFN-g and subsequent nitric oxide production by murine macrophages in response to bacterial lipopolysaccharide."Eur. J.Biochem.. 267. 37-45 (2000)

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  • [文献書誌] Swierzko, A.S., Kirikae, T., kirikae, F., Hirata, M., et al.: "Biological activities of Proteus lipopolysaccharides and their interaction with polymyxin B and a 18-kilodalton cationic antimicrobial protein (CAP18) -derived peptide."J.Med. Microbiol.. 49. 127-138 (2000)

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  • [文献書誌] "Regulatory roles for CD14 and phosphatidylinositol in the signaling via Toll-like receptor 4-MD-2."Biochem. Biophys. Res. Commun.. 268. 172-177 (2000)

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  • [文献書誌] Kirikae, T., Ojima, I., Fuero-Oderda, C., Lin, S., et al.: "Structural significance of the acyl group at the C-10 position and the A ring of the taxane core of paclitaxel for inducting nitric oxide and tumor necrosis factor production by murine macrophages."FEBS Lett.. 478. 221-226 (2000)

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  • [文献書誌] Kirikae, T., Suda, Y., Tamura, H., Yamasu, H., Kirikae, F., et al.: "Protective Effect of OK-432 on Mice against Endotoxemia and Infection with Pseudomonas aeruginosa and Salmonella enteritidis."Jpn. J.Infect. Dis. 53. 53-34 (2000)

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  • [文献書誌] Kohmura, Y., Kirikae, T., Kirikae, F., Nakano, M., Sato, I., et al: "Onapristone (ZK299) blocks the suppresive effect of progesterone, but not that of dexamethasone, on inducible nitric oxide synthase gene expression and nitric oxide production in murine macrophages."Int. J.Immunopharmaco.. 22. 765-774 (2000)

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  • [文献書誌] Kawano, C., Muroi, K., Yoshizaka, M., Kirikae, T., Ozawa, K., et al.: "Filamented Pseudomonas aeruginosa and a markedly high level of endotoxin in cerebrospinal fluid"J.Infect.. 41. 114-115 (2000)

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  • [文献書誌] Kohmura, Y., Kirikae, T., Kirikae, F., Nakano, M., Sato, I et al: "Lipopolysaccharide (LPS)-induced intra-uterine fetal death (IUFD) in mice is principally due to maternal cause but not fetal sensitivity to LPS."Microbiol. Immunol.. 44. 7897-7904 (2000)

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  • [文献書誌] Kakinuma, N., Iwai, H., Takahashi, S., Hamano, K., et al.: "Quinolactacins A, B and C novel quinolone compounds from Penicillium sp EPF-6."J.Antibiot.. 53. 1252-1256 (2000)

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  • [文献書誌] Hashimoto, M., Kirikae, F., Dohi, T., Kusamoto, S., et al.: "Structural elucidation of capsular polysaccharide from a clinical isolate of Bacteroides vulgatus from patient with Crohn's disease."Eur. J.Biochem.. (in press).

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      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hashimoto, M., Kirikae, F., Toyooka, K., Kaneko, A., et al: "Protective Effect of OK-432 on Mice against Endotoxemia and Infection with Pseudomonas aeruginosa and Salmonella enteritidis."Microbiol. Immunol.. (in press).

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      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kirikae,T.,Nitta,T.,Kirikae,F., et al.: "Lipopolysaccharides (LPS) of oral black-pigmented bacteria induce tumor necrosis factor production by LPS-refractory C3H/HeJ macrophages in a different way from LPS of Salmonella."Infect.Immun. 67. 1736-1742 (1999)

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Saito,S.,Matuura,M.,Tominaga,K.,Kirikae,T., et al.: "Important role of membrane-associated CD14 in the induction of IFN-g and subsequent nitric oxide production by murine macrophages in response to bacterial lipopolysaccharide."Eur.J.Biochem.:,. 267. 37-45 (2000)

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Swierzko,,A.S.,Kirikae,T.,Kirikae,F.,Hirata,M., et al.: "Biological activities of Proteus lipopolysaccharides and their interaction with polymyxin B and a 18-kilodalton cationic antimicrobial protein (CAP18)-derived peptide."J.Med.Microbiol.:. 49. 127-138 (2000)

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Akashi,S.,Ogata,H.,Kirikae,F.,Kirikae,T., et al.: "Regulatory roles for CD14 and phosphatidylinositol in the signaling via Toll-like receptor 4-MD-2."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 268. 172-177 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Hashimoto,M.,Kirikae,F.Toyooka,K.,Kaneko,A., et al.: "Protective Effect of OK-432 on Mice against Endotoxemia and Infection with Pseudomonas aeruginosa and Salmonella enteritidis."Microbiol.Immunol.. (in press).

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Teruo Kirikae: "Lipopolysaccharides (LPS) of oral Black-pigmented Bacteria induce Tumor Necrosis Factor Production by LPS-Refractory C3H/HCJ Macrophages in a way different"INFECTION AND IMMUNITY. Vol. 67 No. 4. 1736-1742 (1999)

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      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Anna st Swierzko: "Biological activities of ipopolysaccharides of proteus spp and their in teraction with polymyxin B and 18-k Dacationic antimicrobial protein (CRP-18) derived peptide"J. Med. Microbiol.. 49. 127-138 (2000)

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      1999 実績報告書
  • [文献書誌] 切替照雄: "エンドトキシンと抗腫瘍薬パクリタキセル"MINOPHAGEN MEDICAL REVIEW. 44.6. 313-326 (1999)

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      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Teruo Kirikae: "LPS-dependent changes in the expression of 57kDa and 53kDa cell membrane proteins without participation of C14"J. Endotoxin Res.. 5. 62-65 (1999)

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      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Masayasu Nakano: "Lipopolysaccharide- and paditaxel (Taxol) ?induced tolerance in murine peritoneal macrophages"J. Endotoxin Res.. 5. 102-106 (1999)

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      1999 実績報告書

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公開日: 1999-04-01   更新日: 2016-04-21  

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