| 研究概要 |
Epstein-Barr(EB)ウイルスはヒト初代B細胞をトランスフォームし試験管内発がんを起こす。これには感染初期に同時発現される核蛋白EBNA-2とEBNA-LPが不可欠である。EBNA-2は転写活性化因子として作用し、EBNA-LPはEBNA-2の転写活性化を促進する補因子機能を持つ(Harada ＆ Kieff,J.Virol.,1997)。本研究では、EBNA-LP補因子機能の作用メカニズムを解明するために、EBNA-LPとEBNA-2との相互作用を検討し、さらにEBNA-LPと結合・会合する細胞性蛋白の検索を免疫沈降法および酵母のTwoハイブリッド法で試みた。
(1)flagタグ付きのEBNA-LPを発現させたB細胞株を樹立し、免疫沈降法をおこなってEBNA-LPと作用する細胞性蛋白を抽出し同定した。Hsp70(72/73)との結合が確認され、さらに結合蛋白としてDNA-PK、HA95,Hsp27,proryl4-hydroxylaseα-1,α-tubulin,β-tubulinが同定された(J.Virol.2001b)。
(2)EBNA-2とEBNA-LPとの直接相互作用は調べた限り認められなかったが、EBNA-2が自身のN末端領域を介して多量体を形成する事が転写活性化機能に重要である事を示す結果を得た(J.Virol.2001a)。
(3)EBNA-LPとGa14蛋白との融合蛋白をbateとして酵母中で相互作用する細胞性蛋白遺伝子を検索し数種類の遺伝子を検出した。相互作用が強く認められたクローンの塩基配列を決定し同定した遺伝子の一つは機能不明遺伝子であった。他の研究室から報告された、あるりん酸化酵素基質と結合しミトコンドリアに局在する蛋白HAX1と同一であった。
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