| 研究概要 |
狂犬病ウイルスのヌクレオプロティン(Nタンパク)はRNA結合タンパクで,その機能にはりん酸化が関わっていると思われるが,本研究課題ではりん酸化の機構や役割について検討した.その結果,以下に示す点が明らかとなった.
1)我々が作製したNタンパクに対するモノクローナル抗体(mAbと記す)から,(1)りん酸化されたNタンパクのみを認識するmAb(#5-2-26),および(2)立体構造的エピトープを認識するmAb(#1-7-11など)を見いだした.次に,このmAbを用いて,Nタンパクのりん酸化などの修飾,成熟過程を解析した.
2)りん酸化によって形成されるエピトープを特異的に認識するmAb(#5-2-26)を用いた実験から,NタンパクがウイルスRNAに結合してヌクレオカプシド(NCと記す)を構成する前の段階ではりん酸化されていないことが分かった.
3)ウイルスRNAに結合する前のNタンパクはPタンパクに結合しており,この結合はdeoxycholateの存在下で分離した.一方,分離したNタンパクはどのmAbとも反応しなかったことから,エピトープ部位がPタンパクとの結合により隠れていたわけではないことが示唆された.
4)りん酸化されなくした変異NタンパクもウイルスRNAと結合してNCを形成した.つまり,Nタンパクのりん酸化はRNAに結合してNCを形成する過程あるいは形成した後に起こることが示唆される.
5)りん酸化されない変異Nタンパクを用いた実験や他のmAb(#1-7-11 など)との反応性の変化から,NCを形成したNタンパクは立体構造を変化させ,この変化はりん酸化を必要としないことが分かった.
6)ウイルスRNAとの結合により生じると予想されるNタンパクの立体構造の変化は,その後に行われるりん酸化の有無に関わらず可逆的で,NタンパクをRNAから剥がすと元の立体構造に戻る.
7)PタンパクはNCと結合すると立体構造が変わり,NCとの結合も強固になる.逆に,りん酸化されない変異NタンパクとRNAにより形成されたNCはPタンパクとの結合が非常に弱かった.逆に,NCに結合した時に起こるPタンパクの立体構造の変化はNタンパクのりん酸化に依存し,また,ウイルスRNAポリメラーゼの触媒サブユニット(Lタンパク)の結合に非常に重要であることが示唆された.
|
