| 研究課題/領域番号 |
11670339
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
衛生学
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
山本 正治 新潟大学, 医学部, 教授 (40018693)
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| 研究分担者 |
中平 浩人 新潟大学, 医学部, 講師 (40217758)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2000年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
1999年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | チリ / トウガラシ / 突然変異原物質 / 突然変異原性 / エームス試験 / 胆嚢がん |
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| 研究概要 |
乾燥トウガラシ20gをすり潰し、400mlのメタノールで抽出を行った。抽出液をろ過し蒸発乾固した(メタノール抽出物)。これをヘキサン・水(6:1)液に加え、液-液抽出を行った。ヘキサン層は蒸発乾固し(ヘキサン抽出物)、変異原試験Ames法(TA98+S9mix)に供した。水層はSep-Pak C_<18>カラムに通過させ、水で洗浄。カラムに保持された脂溶性成分をメタノール-水によるステップグラジュエントで溶出させた(10分画)。減圧下で蒸発乾固し(分画抽出物)、変異原試験に供した。水層の分画抽出物の50%メタノール分画(F5)にのみ変異原性が確認された。また辛味成分カプサイシンはこのF5分画とは異なっていた。F5分画から原因物質を同定するため分離を行った。上述操作を繰り返し、得られたF5分画溶出液を減圧濃縮によりメタノールを除去し、水溶液50mlを準備した。本溶液をODSオープンカラムに通過させ、水100mlで洗浄後、30-50%メタノール水溶液でグラジュエント溶出させた。15分ごとの8分画を採取した。各溶出液は減圧下で蒸発乾固させ、変異原試験に供した。5分画(F5-5)に明確な変異原性が確認された。F5-5を更に6分画に分け、各分画を減圧下で蒸発乾固させ、変異原試験に供した。3分画目(F5-5-3)をピークにすべての分画に変異原性が認められた。F5-5-3を用い薄層クロマトグラフィーによる分離確認を行ったところ数個のスポットが確認された。このうちのメインスポットは291nmの紫外部に極大吸収を持つことが確認され、FDマスにより分子量699であることが分かった。しかしこのスポットの変異原性は確認されなかった。今後はHPLCカラムクロマトグラフィーによる分取を行い、変異原性のある分画について更にHPLCマスを用いて原因物質を同定する必要がある。
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