| 研究概要 |
1.ニトリル投与動物における神経毒性発生機序・行動異常発生機序
(1)ニトリル投与動物ではImmediately early gene c-fos産物のFos蛋白質が、前庭神経核を含む若干の神経核に投与1.5時間後から30日後まで免疫組織化学的に確認された。特に30日後までFos発現が認められた神経核は前庭破壊後に観察されるFos発現神経核に一致していたので、ニトリルの前庭傷害作用が推定され行動異常発生との関連が示唆された。
(2)5つのsynaptic marker(γ-aminobutyric acid(GABA),tyrosine hydroxylase(TH),serotonin,serotonin transporter and choline acetyltransferase)の変化を免疫組織化学的に検討した。アリルニトリルは5神経核(medial habenula,interpeduncular nucleus,substantia nigra,dorsal raphe nucleus,median raphe nucleus)にGABA染色性変化をもたらした。GABA染色の程度はmedial habenulaを除くこれらの神経核で投与後2日目で減少し、全ての5神経核で14日目で増加していた。アリルニトリルはまたarcuate nucleus,substantia nigra pars compacta,locus coeruleus,caudoventrolateral reticular nucleusに投与後2日目あるいは14日目でTH染色性変化をもたらした。これらの結果からmedial habenula-interpeduncular nucleus-raphe nuclei路とsubstantia nigraを介したGABA系の異常と行動異常との関連が示唆された。
2.培養PC12細胞におけるアポトーシスカスケードの解析
アリルニトリル(5mM)は培養12時間後に核濃縮とDNAの断片化をもたらした。ヘキスト33258染色で評価された、アリルニトリル誘発性アポトーシスはcaspase-3阻害剤で抑制された。アポトーシス出現に一致して、caspase-3活性の増加、活性型caspase-3(p17)の増加、ミトコンドリアからのcytochromecの遊離の増加、内在性caspase-3の基質poly(ADP-ribose)polymeraseの分解の増加が確認された。これらの結果からアリルニトリルはcytochrome c-caspase-3経路を介してアポトーシスをもたらすことが示された。今後、cytochrome cの遊離を調節するbcl-2familyに焦点をあてた研究が必要である。
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