C型肝炎ウイルス遺伝子導入マウスを用いた治療用ワクチン開発の基礎的研究

• 研究課題/領域番号: 11670493
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 消化器内科学
• 研究機関: 三重大学
• 研究代表者: 玉置 繁憲 三重大学, 医学部・附属病院, 助手 (80260602)
• 研究分担者: GABAZZA Esteban Cesar 三重大学, 医学部, 助手 (00293770) ; 栗林 景容 三重大学, 医学部, 教授 (10064578)
• 研究期間 (年度): 1999 – 2000
• 研究課題ステータス: 完了 (2000年度)
• 配分額: 3,400千円 (直接経費: 3,400千円); 2000年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円); 1999年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
• キーワード: C型肝炎ウイルス / 細胞障害性T細胞 / ワクチン / C型肝炎モデル / HCV / CTL

研究概要

1:C型肝炎マウスモデルの作製
マウス肝臓にHCV構造蛋白のcDNAを直接electroporation法にて導入したところ、16週以上の長期にわたる肝細胞でのHCV構造蛋白の発現が認められ、全ての構造蛋白に特異的な細胞傷害性T細胞(CTL)の誘導が確認された。
2:HCVワクチンによるHCV特異的CTLの誘導
(1)DNAワクチン:elongation factor 1-α(EF1-α)のプロモーターを用いたHCV構造蛋白の発現ベクターを作製し筋肉内接種によるHCVに対するDNAワクチンを試みた。CMVプロモーターを用いたHCV構造蛋白の発現ベクターでは3回以上の免疫が必要であったが、EF1-αプロモーターを用いたベクターでは1回の免疫で高いCTL活性が得られれた。
(2)ペプタイドワクチン:HCV-NS5領域のCTLエピトープペプタイドの筋肉内接種でのCTL誘導を試みた。アジュバントを用いずにペプタイド単独をelectroporation法を用いて筋肉細胞内に誘導したところCTLが誘導され、さらにImmuno Stimulator Sequence(ISS)あるいはB7-1発現ベクターを混合して筋肉内に同様に接種したところさらに高いCTL活性が得られた。
3:In vivoでのワクチン効果の検討
結核菌ワクチンであるBCGにHCV-NS5領域のCTLエピトープを挿入し、マウスの腹腔内接種したところ高いCTL活性が得られた。この免疫したマウスにNS5領域のcDNAを組み込んだワクシニアウイルスをチャレンジし、卵巣でのウイルス力価を検討したところほぼ完全にウイルスの感染が抑制された。

研究成果

• [文献書誌] Nishiumura Y., Tamaki S. 他8名: "A single immunization with a plasmid encoding hepatitis C virus (HCV) structural proteins under the elongation factor 1-α promoter elicits HCV-specific CTLs."Vaccine. 18. 675-680 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kamei A., Tamaki S. 他12名: "Induction of hepatitis C virus specific lymphocytes in mice by an intrahepatic inoculation with an expression plasmid."Virology. 273. 120-126 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Uno-Furuta S., Tamaki S. 他8名: "Induction of virus-specific cytotoxic Tlymphocytes by in vivo electric administration of peptides."Vaccine. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nishimura Y, Kamei A, Uno-Furuta S, Tamaki S, Kim G, Adachi Y, Kuribayashi K, Matsuura Y, Miyamura T and Yasutomi Y: "A single immunization with a plasmid encoding hepatitis C virus(HCV)structural proteins under the elongation factor 1-alpha promoter elicits HCV-specific cytotoxic T-lymphocytes(CTL)."Vaccine. 18. 675-680 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kamei A, Tamaki S, Taniyama H, Takamura S, Nishimura Y, Kagawa Y, Uno-Furuta S, Kaito M, Kim G, Toda M, Matsuura Y, Miyamura T, Adachi Y and Yasutomi Y: "Induction of hepatitis C virus-specific cytotoxic T lymphocytes in mice by an intrahepatic inoculation with an expression plasmid."Virology. 20. 120-126 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Uno-Furuta S, Tamaki S, Takebe Y, Takamura S, Kamei A, Kim G, Kuromatsu I, Toda M, Kaito M, Adachi Y and Yasutomi Y: "Induction of virus-specific cytotoxic T lymphocytes by in vivo electric administration of peptides."Vaccine. (in press).
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nishimura Y.,Tamaki S.他8名: "A single immunization with a plasmid encoding hepatitis C virus (HCV) structural proteins under the elongation factor 1-α promoter elicits HCV-specific CTLs."Vaccine. 18. 675-680 (1999)
• [文献書誌] Kamei A.,Tamaki S.他12名: "Induction of hepatitis C virus specific lymphocytes in mice by an intrahepatic inoculation with an expression plasmid."Vriology. 273. 120-126 (2000)
• [文献書誌] Uno-Furuta S.,Tamaki S.他8名: "Induction of virus-specific cytotoxic T lymphocytes by in vivo electric administration of peptides."Vaccine. (in press).
• [文献書誌] Nishimura Y.他: "A single immunization with a plasmid encoding hepatitis C virus(HCV) structural proteins under the elongation factor l-α promoter elicits HCV-specific CTL"Vaccine. 18. 675-680 (1999)