| 研究課題/領域番号 |
11670564
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
呼吸器内科学
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| 研究機関 | 筑波大学 |
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研究代表者 |
佐藤 浩昭 筑波大学, 臨床医学系, 講師 (00261800)
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| 研究分担者 |
菅間 博 筑波大学, 基礎医学系, 講師 (10195191)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
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| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2000年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1999年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
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| キーワード | hn RNP A2 / B1 / 肺癌 / 癌 / モノクローナル抗体 / テロメア / テロメラーゼ / hnRNP |
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| 研究概要 |
A2/B1に特異的なアミノ酸配列を含むオリゴペプチドを合成し、-MAPレジンの形でマウスを免疫した。ハイブリドーマを作成し、Western blotting等を用いたスクリーニングをおこない、A2蛋白に特異的なモノクローナル抗体である4G8を作成した。
癌細胞を同調培養し、A2/B1蛋白の細胞周期による変化を、定量的に解析した。A2/B1は主にG1期に転写され合成され、またA2蛋白は細胞周期を通してほぼ一定に維持されるが、B1蛋白はG2とM期に減少することを明らかにした。この細胞周期における代謝の差は、両蛋白の機能の違いを示唆するものと考えられた。
組換え蛋白を用いて一本鎖テロメアDNAとの結合能、テロメア維持、伸長機構との関係を検討した結果、A2蛋白に比べ、B1蛋白とマイナーアイソフォームB0b蛋白は、テロメアの一本鎖テロメアDNAと高い親和性を示し、テロメア配列と動的に結合することを明らかにした。B1/B0b蛋白はDNA分解酵素からテロメアを保護し、テロメラーゼによるテロメア伸長反応を亢進させる機能を有することを明らかにした。
A2/B1蛋白の発現様式を肺癌、消化管由来の癌培養細胞や組織標本で検討した結果、A2/B1蛋白の過剰発現は肺癌に特異的ではなく、他臓器由来の癌細胞にもみられ、その過剰発現は癌に見られる普遍的な現象と考えらえた。
B0蛋白を過剰発現するトランスジェニックマウスを作成し、表現型の検討をおこなった。気管支上皮を含む呼吸器系には、腫瘍形成などの変化は見られず、肺癌発生との直接の因果関係はないことが明らかになった。
A2/B1蛋白のアイソフォームであるB0b蛋白を過剰発現するトランスジェニックマウスは、雄の妊孕性が低下すことから、精子形成とテロメア構造および機能との関連について、今後研究を発展させる予定である。
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