| 研究概要 |
慈恵医大胆管癌患者より樹立されたTK細胞はその培養上清中に糖鎖腫瘍マーカー:CA19-9、CA50およびシアリルルイスx(sLe^x)抗原を多量に分泌するという特性を持つ.このTK細胞にIL-2及びB7-1遺伝子を単独/重複して導入したところin vitroでの細胞傷害効果とSCIDマウス移植腫瘍での拒絶が起こった.遺伝子導入細胞ではさらに細胞が本来産生していた糖鎖腫瘍マーカーの産生量が低下した.癌化・転移には糖鎖合成に働く糖転位酵素や糖鎖の修飾酵素の活性変動が関与しているため腫瘍拒絶と糖鎖腫瘍マーカー産生量の低下には強い関連性が示唆された.現在クローニングされている5種のヒトα-1.3-フコース転移酵素;Fuc-TIII,TIV,TV,TVI,TVIIのうちFuc-TIII、TVIIがCA19-9およびsLe^x抗原等の合成に関与している.本研究ではwild typeと遺伝子導入細胞での各酵素発現と酵素活性およびin vivoでの腫瘍拒絶について検討を行った.ウエスタンブロット法によるwild typeと遺伝子導入細胞の糖鎖腫瘍マーカー発現量とHPLCによる酵素活性の比較検討では、CA19-9、CA50およびsLe^x産生量は各遺伝子導入細胞で異なった結果を示したがHPLC法による酵素活性との明らかな関連は観察されなかった.またPCR,RT-PCR法によりwild typeと遺伝子導入細胞でのFuc-TIII、Fuc-TVII酵素の変異等の検討を行ったが、Fuc-TIIIのgene-specific部分についてのDNAシークエンス分析ではいずれの細胞でも変異は観察されず、Fuc-TVIIのRT-PCR法による検討でも差はなかった.しかし、SCIDマウスを用いた腫瘍移植実験では明らかな腫瘍拒絶が確認されたため今後は異なったアプローチでの解明が必要とされた.
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