ヒト1番染色体短腕の1p36領域における神経芽腫関連がん抑制遺伝子の探索

• 研究課題/領域番号: 11670808
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 小児科学
• 研究機関: 千葉県がんセンター
• 研究代表者: 市川 美紀 (大平 美紀) 千葉県がんセンター, 研究局・生化学研究部, 研究員 (20311384)
• 研究分担者: 影山 肇 千葉県がんセンター, 研究局・生化学研究部, 研究員 (50260253) ; 中川原 章 千葉県がんセンター, 研究局・生化学研究部, 部長 (50117181)
• 研究期間 (年度): 1999 – 2000
• 研究課題ステータス: 完了 (2000年度)
• 配分額: 3,600千円 (直接経費: 3,600千円); 2000年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円); 1999年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
• キーワード: 1p36 / 神経芽腫 / ホモ欠失 / ポジショナルクローニング / がん抑制遺伝子 / LOH / コンティグ / ゲノム解析

研究概要

ヒト1番染色体p36.2-p36.3は神経芽腫関連領域といわれている。平成11年度までに本研究におけるLOH解析の結果、この領域の中でも特にDIS450からDIS244までの約1Mbの領域が可能性が高いという結果が得られた。これに基づき、この領域について神経芽腫関連遺伝子のポジショナルクローニングを行っている。以下に成果をまとめる。
1)DIS244周辺領域におけるホモ欠失の同定
上記の領域について40種類の神経芽腫細胞株を用いてホモ欠失の有無を検討したところ、2種類の細胞株にDIS244周辺領域におけるホモ欠失を同定した。そこで、その欠失領域をカバーする約800kbのPACコンティグを作製し、cDNAライブラリースクリーニングとPACクローンDNAのラフシークエンシングにより遺伝子の同定を行った。その結果、6つの遺伝子をこの領域に同定した。これらの遺伝子は代謝酵素PGDH、ソマトスタチン様ペプチドCORTの他、アポトーシスに関連するDFF45、ユビキチン-プロテアソーム系に関連するUFD2とPEX14、キネシンスーパーファミリーのひとつKIF1Bbetaであった。(Ohira et al. Oncogene2000)
2)がん抑制遺伝子としての可能性についての検討
上記の6つの遺伝子について神経芽腫におけるがん抑制遺伝子としての可能性について検討した。まず4つの遺伝子について神経芽腫サンプルを用いた遺伝子変異検索をPCR-SSCP法にて行ったが、変異の頻度は非常に低かった。さらに各遺伝子の神経芽腫での発現パターンを見るため、各種神経芽腫細胞株および患者サンプルのRNAを用いたRT-PCRを行った。この時、比較すべき正常組織が入手不可能なため予後良好タイプの神経芽腫と予後不良タイプの神経芽腫とで比較した。少なくとも3つの遺伝子に関して予後不良群における発現が予後良好群に比較して1/3以下に低くなっていたことから、この領域がメチル化などのimprintingを受けている可能性が考えられた。近年いくつかのがん抑制遺伝子ががん組織においてimprintingによる発現低下を引き起こしていることが知られているため、これについては引き続き解析をすすめる必要がある。

研究成果

• [文献書誌] Ohira M, Shishikura T, et al.: "Hunting the subset-specific genes of neuroblastoma : expression profiling and differential screening of the full-length-enriched oligo-capping cDNA libraries."Med. Pediatr. Oncol.. 35. 547-549 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kawamoto T, Ohira M, et al.: "Association between favorable neuroblastoma and high expression of the novel metalloproteinase gene, nbla3145/XCE, cloned by differential screening of the full-length-enriched oligo-capping neuroblastoma cDNA libraries."Med. Pediatr. Oncol.. 35. 628-631 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nakagawara A, Ohira M, et al.: "Identification of the homozygously deleted region at chromosome 1p36.2 in human neuroblastoma."Med. Pediatr. Oncol.. 35. 516-521 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Furuta S, Ohira M, et al.: "Analysis of loss of heterozygosity at 16p12-p13 (familial neuroblastoma locus) in 470 neuroblastomas including both sporadic and mass screening tumors."Med. Pediatr. Oncol.. 35. 531-533 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Ohira M, Kageyama H, et al.: "Identification and characterization of a 500-kb homozygously deleted region at 1p36.2-p36.3 in a neuroblastoma cell line."Oncogene. 19. 4302-4307 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nagai M, Ohira M, et al.: "Identification of the full-length KIAA0591 gene encoding a novel kinesin-related protein which is mapped to the neuroblastoma suppressor gene locus at 1p36.2."Int. J. Oncol.. 16. 907-916 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Islam A, Ohira M, et al.: "High expression of Survivin, mapped to 17q25, is significantly associated with poor prognostic factors and promotes cell survival in human neuroblastoma."Oncogene. 19. 617-623 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Hanaoka E, Ohira M, et al.: "Molecular cloning and expression analysis of the human DA41 gene and its mapping to chromosome 9q21.2-q21.3. "J Hum Genet.. 45. 188-191 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Ozaki T, Ohira M, et al.: "NFBD1/KIAAO170 is a novel nuclear transcriptional transactivator with BRCT domain. "DNA Cell Biol.. 19. 475-485 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Ichimiya, S. , Ohira, M. et al.: "p73 at chromosome 1p36.3 is lost in advanced stage neuroblastoma but its mutation is infrequent."Oncogene. 18. 1061-1066 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Seki, N. , Ohira, M. et al.: "Chromosomal assignment of a human apoptosis-associated tyrosine kinase gene on chromosome 17q25.3 by somatic hybrid analysis and fluorescence in situ hybridization."J. Hum. Genet.. 44. 141-142 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Ueki, N. , Ohira, M. et al.: "Isolation and chromosomal assignment of human genes encoding cofactor of LIM homeodomain proteins, CLIM1 and CLIM2."J. Hum. Genet.. 44. 112-115 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Seki, N. , Ohira, M. et al.: "Structure, expression profile and chromosomal location of an isolog of DNA-PKcs interacting protein (KIP) gene 1."Biochim. Biophys. Acta. 1444. 143-147 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Ohira M, Shishikura T, Kawamoto T, Inuzuka H, Morohashi A, Takayasu H, Kageyama H, Takada N, Takahashi M, Sakiyama S, Suzuki Y, Sugano S, Kuma H, Nozawa I, Nakagawara A.: "Hunting the subset-specific genes of neuroblastoma : expression profiling and differential screening of the full-length-enriched oligo-capping cDNA libraries"Med. Pediatr. Oncol.. 35. 547-9 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Kawamoto T, Shishikura T, Ohira M, Takayasu H, Morohashi A, Takada N, Takahashi M, Suzuki Y, Sugano S, Hori T, and Nakagawara A.: "Association between favorable neuroblastoma and high expression of the novel metalloproteinase genem, nbla3145/XCE, cloned by differential screening of the full-length-enriched oligo-capping neuroblastoma cDNA libraries"Med. Pediatr. Oncol. 35. 628-31 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nakagawara A, Ohira M, Kageyama H, Mihara M, Furuta S, Machida T, Takayasu H, Islam A, Nakamura Y, Takahashi M, Shishikura T, Kaneko Y, Toyoda A, Hattori M, Sakaki Y, Ohki M, Horii A, Soeda E, Inazawa J, Seki N, Kuma H, Nozawa, I, and Sakiyama S: "Identification of the homozygously deleted region at chromosome 1p36.2 in human neuroblastoma."Med. Pediatr. Oncol. 35. 516-21 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Furuta S, Ohira M, Machida T, Hamano S, and Nakagawara A.: "Analysis of loss of heterozygosity at 16p12-p13(familial neuroblastoma locus)in 470 neuroblastomas including both sporadic and mass screening tumors."Med. Pediatr. Oncol.. 35. 531-3 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Ohira M, Kageyama H, Mihara M, Furuta S, Machida T, Shishikura T, Takayasu H, Islam A, Nakamura Y, Takahashi M, Tomioka N, Sakiyama S, Kaneko Y, Toyoda A, Hattori M, Sakaki Y, Ohki M, Horii A, Soeda E, Inazawa J, Seki N, Kuma H, Nozawa I, and Nakagawara A.: "Identification and characterization of a 500-kb homozygously deleted region at 1p36.2-p36.3 in a neuroblastoma cell line"Oncogene. 19. 4302-7 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nagai M, Ichimiya S, Ozaki T, Seki N, Mihara M, Furuta S, Ohira M, Tomioka N, Nomura N, Sakiyama S, Kubo O, Takakur K, Hori T, and Nakagawara A.: "Identification of the full-length KIAA0591 gene encoding a novel kinesin-related protein which is mapped to the neuroblastoma suppressor gene locus at lp36.2"Int. J.Oncol.. 16. 907-16 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Islam A.Kageyama H, Takada N, Kawamoto T, Takayasu H, Isogai E, Ohira M, Hashizume K, Kobayashi H, Kaneko Y, and Nakagawara A.: "High expression of Survivin, mapped to 17q25, is significantly associated with poor prognostic factors and promotes cell survival in human neuroblastoma."Oncogene. 19. 617-23 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Hanaoka E, Ozaki T, Ohira M, Nakamura Y, Suzuki M, Takahashi E, Moriya H, Nakagawara A, and Sakiyama S.: "Molecular cloning and expression analysis of the human DA41 gene and its mapping to chromosome 9q21.2-q21.3"Hum Genet.. 45. 188-91 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Ozaki T, Nagase T, Ichimiya S, Seki N, Ohira M, Nomura N, Takada N, Sakiyama S, Weber BL, and Nakagawara A.: "NFBD1-KIAA0170 is a novel nuclear transcriptional transactivator with BRCT domain."DNA Cell Biol.. 19. 475-85 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Ichimiya, S., Nimura, Y., Kageyama, H., Takada, N., Sunahara, M., Shishikura, T., Nakamura, Y., Sakiyama, S., Seki, N., Ohira, M., Kaneko, Y., McKeon, F., Caput, D., and Nakagawara, A.: "p73 at chromosome lp36.3 is lost in advanced stage neuroblastoma but its mutation is infrequent."Oncogene. 18. 1061-1066 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Seki, N., Hayashi, A., Hattori, A., Kozuma, S., Ohira, M., Hori, T., and Saito, T.: "Choromosomal assignment of a human apoptosis-associated tyrosine kinase gene on chromosome 17q25.3 by somatic hybrid analysis and fluorescence in situ hybridization."J.Hum. Genet. 44. 141-142 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Ueki, N., Seki, N., Yano, K., Ohira, M., Saito, T., Masuho, Y., and Muramatsu, M.: "Isolation and chromosomal assignment of human genes encoding cofactor of LIM homeodomain proteins, CLIM1 and CLIM2."J.Hum. Genet. 44. 112-115 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Seki, N., Hattori, A., Hayashi, A., Kozuma, S., Ohira, M., Hori, T., Saito, T.: "Structure, expression profile and chromosomal location of an isolog of DNA-PKcs interacting protein(KIP)genel."Biochim. Biophys. Acta.. 1444. 143-147 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Ohira M,Shishikura T, et al.: "Hunting the subset-specific genes of neuroblastoma : expression profiling and differential screening of the full-length-enriched oligo-capping cDNA libraries."Med.Pediatr.Oncol.. 35. 547-549 (2000)
• [文献書誌] Kawamoto T,Ohira M, et al.: "Association between favorable neuroblastoma and high expression of the novel metalloproteinase gene, nbla3145/XCE, cloned by differential screening of the full-length-enriched oligo-capping neuroblastoma cDNA libraries"Med.Pediatr.Oncol.. 35. 628-631 (2000)
• [文献書誌] Nakagawara A,Ohira M, et al.: "Identification of the homozygously deleted region at chromosome 1p36.2 in human neuroblastoma."Med.Pediatr.Oncol.. 35. 516-521 (2000)
• [文献書誌] Furuta S,Ohira M, et al.: "Analysis of loss of heterozygosity at 16p12-p13 (familial neuroblastoma locus) in 470 neuroblastomas including both sporadic and mass screening tumors."Med.Pediatr.Oncol.. 35. 531-533 (2000)
• [文献書誌] Ohira M,Kageyama H, et al.: "Identification and characterization of a 500-kb homozygously deleted region at 1p36.2-p36.3 in a neuroblastoma cell line."Oncogene. 19. 4302-4307 (2000)
• [文献書誌] Nagai M,Ohira M, et al.: "Identification of the full-length KIAA0591 gene encoding a novel kinesin-related protein which is mapped to the neuroblastoma suppressor gene locus at 1p36.2."Int.J.Oncol.. 16. 907-916 (2000)
• [文献書誌] Islam A,Ohira M, et al.: "High expression of Survivin, mapped to l7q25,is significantly associated with poor prognostic factors and promotes cell survival in human neuroblastoma."Oncogene. 19. 617-623 (2000)
• [文献書誌] Hanaoka E,Ohira M, et al.: "Molecular cloning and expression analysis of the human DA41 gene and its mapping to chromosome 9q21.2-q21.3."J Hum Genet.. 45. 188-191 (2000)
• [文献書誌] Ozaki T,Ohira M, et al.: "NFBD1/KIAA0170 is a novel nuclear transcriptional transactivator with BRCT domain."DNA Cell Biol.. 19. 475-485 (2000)
• [文献書誌] Nagai M.,Ohira M.et al.: "Identification of the full-length KIAA0591 gene encoding a novel kinesin-related protein which is mapped to the neuroblastoma suppressor gene locus at 1p36.2"Int.J.Oncol.. (in press).
• [文献書誌] Islam A.,Ohira M.et al.: "High expression of Survivin,mapped to 17q25,is significantly associated with poor prognostic factors and promotes cell survival in human neuroblastoma"Oncogene. 19. 617-623 (2000)
• [文献書誌] Ichimiya S.,Ohira M.et al.: "p73 at chromosome 1p36.3 is lost in advanced stage neuroblastoma but its mutation is infrequent"Oncogene. 18. 1061-1066 (1999)
• [文献書誌] Seki N.,Ohira M.et al.: "Chromosomal assignment of a human apoptosis-associated tyrosine kinase gene on chromosome 17q25.3 by somatic hybrid analysis and fluorescence in situ hybridization"J.Hum.Genet.. 44. 141-142 (1999)
• [文献書誌] Ueki N.,Ohira M.et al.: "Isolation and chromosomal assignment of human genes encoding cofactor of LIM homeodomain proteins,CLIM1 and CLIM2"J.Hum.Genet.. 44. 112-115 (1999)
• [文献書誌] Seki N.,Ohira M.et al.: "Structure,expression profile and chromosomal location of an isolog of DNA-PKcs interacting protein(KIP)gene 1"Biochim.Biophys.Acta. 1444. 143-147 (1999)