• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 前のページに戻る

海馬長期増強現象におけるニューロフィラメントのリン酸化の検討-アルツハイマー病における神経細胞機能異常との関連において-

研究課題

研究課題/領域番号 11670942
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 精神神経科学
研究機関大阪大学

研究代表者

中村 祐  大阪大学, 医学系研究科, 助手 (70291440)

研究分担者 田中 稔久  大阪大学, 医学系研究科, 助手 (10294068)
工藤 喬  大阪大学, 医学系研究科, 講師 (10273632)
武田 雅俊  大阪大学, 医学系研究科, 教授 (00179649)
吉田 成孝  奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス科, 助教授 (20230740)
研究期間 (年度) 1999 – 2000
研究課題ステータス 完了 (2000年度)
配分額 *注記
3,300千円 (直接経費: 3,300千円)
2000年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1999年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
キーワード長期増強現象 / neurofilament / phosphorylation / CaMK / Rho / phoshorylation / Rh0
研究概要

海馬長期増強現象においてリン酸化により種々の細胞骨格に変化がみられると考えられ、神経細胞の主要細胞骨格であるニューロフィラメントもリン酸化を受けることが考えられる。まず、Rho kinaseによるNF-Lのリン酸化部位であるSer-26を中央部含む10残基程度のNC端側にCys残基加えたリン酸化ペプチドより、Ser-26の部位のリン酸化を特異的に認識する抗体を作成し、精製した抗体の特異性の確認を行った。400ミクロンのマウス海馬切片をロータリースライサーに作製し、fEPSPをモニターするために外部電極を挿入し、灌流液下にて高頻度刺激を行い長期増強現象を生じた切片の作成を行った。この際に、コントロールとして、test pulseのみの切片、AP-5(NMDA受容体遮断剤)及びKN-62(CaMKII阻害剤)を加えた灌流液下にて高頻度刺激を行った切片も合わせて作成を行った。これらの切片よ凍結切片を作製し、精製したリン酸化部位(Ser-26,-51,-55.-57)特異的な抗NF-L抗体を用いて、免疫組織化学的に検討し、長期増強現象に関与するリン酸化部位を検索したところ、Ser-57の部位のリン酸化を特異的に認識する抗体でのみ、繊維状の構造物が染色された。また、AP-5及びKN-62を用いた切片では、これらの染色性が失われることから、長期増強現象においてCaMKIIによるNF-Lのリン酸化が生じていることが示された。次にビオチン化NF-L抗体を作成し、これとECL法を用いることにより、リン酸化を特異的に認識する抗体により免疫沈降したNF-Lを高感度に検出する系を確立した。次に長期増強現象を生じたマウス海馬切片をホモジェネイトし、リン酸化部位(Ser-26,-51,-55,-57)特異的な抗NF-L抗体を用いて、免疫沈降を行い、さきに確立した系を用いてリン酸化NF-Lを検出したところ、長期増強現象においてCaMKIIによるNF-Lのリン酸化が生じていることが確認された。

報告書

(3件)
  • 2000 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1999 実績報告書
  • 研究成果

    (15件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (15件)

  • [文献書誌] Nakamura,Y.,Hashimoto,R., et al.: "Major phosphorylation site (Ser-55) of neurofilament L by cyclic AMP dependent protein kinase A in rat primary neuronal culture."J.Neurochem.. 74. 949-959 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hashimoto,R.,Nakamura,Y., et al.: "Site-specific phosphorylation of neurofllament-L is mediated by calcium/calmodulin dependent protein kinase II in the apical dendrites during long-term potentiation."J.Neurochem.. 75. 373-382 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hashimoto,R.,Nakamura,Y., et al.: "Phosphorylation of neurofilament L during LTD"NeuroReport. 11. 739-2742 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakamura,Y.,Hashimoto,R., et al.: "Localized phosphorylation of vimentin by Rho-kinase in neuroblastoma N2a cells"Genes Cells. 5. 823-837 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakamura, Y., Hashimoto, R., et al.: "Major phosphorylation site (Ser-55) of neurofilament L by cyclic AMP dependent protein kinase A in rat-primary neuronal culture"J.Neurochem.. 74. 949-959 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hashimoto, R., Nakamura, Y., et al.: "Site-specific phosphorylation of neurofilament-L is mediated by calcium/caimodulin dependent protein kinase II in the apical dendrites during long-term potentiation."J.Neurochem.. 75. 373-382 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Hashimoto, R., Nakamura, Y., et al.: "Phosphorylation of neurofilament L during LTD"NeuroReport. 11. 739-2742 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakamura, Y., Hashimoto, R., et al.: "Locallzed phosphorylation of vimentin by Rho-kinase in neuroblastoma N2a cells"Genes Cells. 5. 823-837 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] T Kudo, K Imaizumi, H Tanimukai, T Katayama, M Sato, U Nakamura, T Tanaka, Y Kashiwagi, Y Jinno, M Tohyama, M Takeda: Neurobiol Aging. 21. 215-224 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakamura,Y.,Hashimoto,R., et al.: "Major phosphorylation site (Ser-55) of neurofilament L by cyclic AMP dependent protein kinase A in rat primary neuronal culture"J.Neurochem.. 74. 949-959 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Hashimoto,R.,Nakamura,Y., et al.: "Site-specific phosphorylation of neurofilament-L is mediated by calcium/calmodulin dependent protein kinase II in the apical dendrites during long-term potentiation,"J.Neurochem.. 75. 373-382 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Hashimoto,R.,Nakamura,Y., et al.: "Phosphorylation of neurofilament L during LTD"Neuro Report. 11. 739-2742 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Nakamura,Y.,Hashimoto,R., et al.: "Site-specific phosphorylation of neurofilament-L is mediated by calcium/calmodulin dependent protein kinase II in the apical dendrites during long-term potentiation,"Genes Cells. 5. 823-837 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Nakamura Y.,Hashimoto R.et al.: "Major phosphorylation site (Ser-55) of neurofilament L by cyclic AMP dependent protein kinase A in rat primary neuronal culture"J. Neurochem.. 74. 949-959 (2000)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Hashimoto R.,Nakamura Y.et al.: "Site-specific phosphorylation of neurofilament-L is mediated by calcium/calmodulin dependent protein kinase II in the apical dendrites during long-term potentiation,"J. Neurochem.. (印刷中).

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書

URL: 

公開日: 1999-04-01   更新日: 2016-04-21  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi