| 研究課題/領域番号 |
11671575
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
泌尿器科学
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| 研究機関 | 大阪市立大学 |
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研究代表者 |
川嶋 秀紀 大阪市立大学, 医学部, 助手 (70234060)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
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| 配分額 *注記 |
1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
2000年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
1999年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | CYP3A5 / human prostate / unique 5′-untranslated sequence / protein expression / purification / 6β-hydroxylation / testosterone / progesterone / unique 5'-untranslated sequence / P450・3A5 / uniqne 5'-untronslated sequence |
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| 研究概要 |
本研究では、ヒト前立腺ライブラリーよりステロイドホルモン代謝型P-450の一つであるCYP3A5のcDNAを単離した。前立腺のCYP3A5のcDNAはユニークな5'-非翻訳領域を持っており肝臓と異なる転写調節を受けている事が示唆された。更にヒトゲノムのBACライブラリーをCYP3A5のcDNAをプローブとしてスクリーニングしたところ5個の陽性クローンが得られた。それらをサザン解析したところ特異的な5'-非翻訳領域がそのうちの2個のクローンに含まれている事が示された。またこの遺伝子を大腸菌内で発現させた後Ni-NTAカラムを用いてspecific contentが4.4nmol/min/nmol P450まで精製した。この精製蛋白はテストステロン及びプロゲステロンの6β-水酸化活性を有していたがDHTに対する活性は認められなかった。テストステロン及びプロゲステロンの6β-水酸化活性反応のKm値は各々143μMと114μMで比較的低い値である事も示された。
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