| 研究課題/領域番号 |
11671579
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
泌尿器科学
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| 研究機関 | 北里大学 |
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研究代表者 |
頴川 晋 北里大学, 医学部, 講師 (60160347)
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| 研究分担者 |
桑尾 定仁 北里大学, 医学部, 助教授 (70137925)
岩村 正嗣 北里大学, 医学部, 講師 (20176564)
内田 豊昭 北里大学, 医学部, 講師 (70146489)
馬場 志郎 北里大学, 医学部, 教授 (00051889)
高垣 洋太郎 北里大学, 医学部, 教授 (50281324)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
2001年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2000年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
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| キーワード | 前立腺癌 / 癌特異遺伝子 / クローニング / 生物学的活性 / 臨床的重要性 / cDNA library / 遺伝子スクリーニング |
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| 研究概要 |
我々は新規発現遺伝子を見つけだすために人の前立腺癌組織よりAcid-Guanidinium-Thiocyanate-Phenol-Chloroform (AGPC)法によってtotal RNAを抽出し、異なる条件下の細胞で発現しているpoly (A) tailを持つmRNAの差異を見つけるためにDifferential Display (DD)法を行い、次に蛍光イメージアナライザーにて解析、300bp以上の癌特異的で差異の強いバンド96個を切り出した。これらをさらに分離、精製してその内の18サンプルを、pGEM-TEasy VectorにTA-Cloningし、ゲノムDNAシークエンスより得られた結果をジーンバンクのデータと比較、検索を行った。シークエンスより得られた遺伝子配列よりプローブを設計し、我々が作成したcDNAライブラリーのオリゴヌクレオチドプローブを用いたハイブリダイゼーションによるスクーニングも行った。遣伝子のクローニングをしたうちの1サンプルが、Human Lactoferin mRAN (Accession No. M93150)2360bpの3'末端に近い361bpと同一であることが確認された。また、他の臨床検体に対するLactoferinの発現の有無を確認するため、ノーザンハイブリダイゼーションおよびRT-PCRを行った。この結果、正常組織においての同遺伝子の発現は、骨格筋、胸腺、脾臓、肝臓、肺、骨髄、乳腺、前立腺、胃、気管に見られた。RT-PCR解析では、前立腺癌10例中5例に発現が認められた。前立腺癌でのLactoferin発現には個体差がありLactoferin発現は一様ではないことが示唆された。現在、臨床情報と対照して意義を検討中である。
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