Gene Gunを用いた脾臓内遺伝子導入による神経芽腫遺伝子治療

• 研究課題/領域番号: 11671775
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 小児外科学
• 研究機関: 東京慈恵会医科大学
• 研究代表者: 山崎 洋次 東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (70114147)
• 研究分担者: 吉澤 穣治 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (80261220) ; 三澤 健之 東京慈恵会医科大学, 医学部, 講師 (50260956) ; 吉田 和彦 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助教授 (90191577)
• 研究期間 (年度): 1999 – 2001
• 研究課題ステータス: 完了 (2001年度)
• 配分額: 3,200千円 (直接経費: 3,200千円); 2001年度: 700千円 (直接経費: 700千円); 2000年度: 700千円 (直接経費: 700千円); 1999年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
• キーワード: Gene gun / 神経芽腫 / Gene Gun / 遺伝子治療 / 遺伝子導入 / A / Jマウス / 胎児マウス / 機能遺伝子

研究概要

平成11年度は、胎児皮膚にGene Gunを用いてEGFP遺伝子の導入が可能であるか否かを検討した。この結果、Gene Gunによる遺伝子導入は、胎児の発達に影響を及ぼさないことが確認された。この研究成果は、日本外科学会、日本小児外科学会において発表し、高く評価された。平成12年度は、EGFP遺伝子を脾臓内に導入して、そのhomingを検討した。その結果、EFGP遺伝子は、脾臓のみならず、門脈系を経由して肝臓、骨髄にまで達し、発現していることが確認され、遺伝子導入臓器として脾臓の有用性が確認された。平成13年度ではInterluekin 12の遺伝子をCMVのプロモーターに接続した遺伝子を、Gene Gunを用いてマウス脾臓内に導入した。このマウスを解析したところ脾臓のみならず,肝臓、骨髄においてもInterluekin 12の発現が認められた。遺伝子を付着させる金粒子の大きさは1μmのものを用い、Gene Gunのヘリウム圧は、100psi〜140psiに設定して実験を行なった。さらに、マウス神経芽腫細胞C1300を皮下移植したマウスに、腫瘍細胞移植後7日目にInterleukin 12を発現する遺伝子を脾臓内にGene Gunを用いて導入した。コントロールにはInterleukin 12を発現しない遺伝子を導入した。その結果、コントロール群では腫瘍が増殖し、肝転移が認められたが、Interleukin 12の遺伝子を導入したマウスでは、腫瘍増植は認められず、肝転移も認められなかった。現在、この遺伝子発現を検討中である。
【学会発表】
平成14年10月のAmerican College of Surgeonsにおいて発表予定である。またJoumal of Pediatric Surgeryに投稿し、掲載が受理されている。