| 研究概要 |
発癌過程におけるテロメラーゼ活性とp53およびアポトーシスの関係を,in vivoで組織学的な変化と対比しながら観察することを目的に本研究を行った.実験には5週齢SD系オスラットを用いた.50ppmの4-nitroquinoline1-oxide(4NQO)を投与し4,8,12,16,20,24週後にそれぞれの舌を採取した.各群についてTUNEL法によるアポトーシス細胞,免疫組織染色によるp53陽性細胞を算定した.さらにStretch PCR法によりテロメラーゼ活性を検出した.すなわち,各組織から細胞抽出液を作製し,基質プライマーにテロメア繰り返し配列を付加させる伸長反応を行った後,rTaqを用いてPCR反応を行い,ゲル上に電気泳動してラダーパターンを観察した.病理組織学的には8週で舌粘膜上皮に増殖性変化,12週で異形成変化が出現し,16週以降に発癌が始まった.p53の発現は4NQO投与後,経時的に増加していた.アポトーシスも同様に増加していったが,多くのラットで発癌が観察された16週以降には,p53が増加するにもかかわらずアポトーシスは減少した.テロメラーゼ活性は4週以降の実験群で明らかに認められた.以上の結果から,テロメラーゼ活性の増加はp53タンパクの発現とほぼ同時に起こり,組織学的な変化に先行することが明らかになった.化学発癌過程の初期において,発癌刺激によってアポトーシスが促進されると同時に,細胞寿命が延長されるという相反する作用が働くと考えられた.
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