| 研究課題/領域番号 |
11672287
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
病態検査学
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| 研究機関 | 東北大学 |
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研究代表者 |
小林 典裕 東北大学, 大学院・薬学研究科, 助教授 (90205477)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2000年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
1999年度: 2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
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| キーワード | 抗体模倣ペプチド / 抗体工学 / ミニ抗体 / 臨床分析化学 / 一本鎖Fvフラグメント / 11-デオキシコルチゾール / ブフラロール |
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| 研究概要 |
抗体は多岐にわたる標的抗原に対して高い特異性と親和力を示すため、臨床化学分析における機能性器材として利用価値が高い。しかし、天然の抗体には分子量が大きいこと(約15万)に起因する種々の制約があるうえ、十分な特異性・親和力を示さない場合も少なくない。そこで、抗体工学的技術により天然型抗体の構造と機能を改変して、超高感度・高選択的な臨床化学分析システムの確立に有用な低分子量の抗体模倣ペプチド(ミニ抗体)の創製を企てた。その一環として、副腎皮質ステロイドである11-デオキシコルチゾール(11-DC)及び光学活性なβ遮断薬である(1R)-ブフラロール(BUF)をモデル抗原に取り上げ、抗体H鎖及びL鎖の可変部(V_H、V_L)をリンカーペプチドで連結した一本鎖Fvフラグメント(scFv;分子量約2.5万)の調製を検討した。まず、抗11-DC及び抗BUF抗体産生ハイブリドーマ株からRNAを抽出してRT-PCR法によりV_H及びV_L遺伝子をクローニングした。ついで、これらをリンカー配列[(Gly_4Ser)_3]を介して5'-V_H-リンカー-V_L-3'の順序で連結して、scFv遺伝子を構築した。これを抗体発現用ベクターに挿入したのち、大腸菌に導入し、抗11-DC及び抗BUF抗体のscFvを調製することに成功した。これらの親和力をRIA又はELISAで調べたところ、11-DCのscFvは由来するモノクローナル抗体(Mab)と同等(Ka=2x10^<10>M^<-1>)、BUFのscFvは約1/2(Ka=6x10^8M^<-1>)の高い値を示した。また、交差反応性試験の結果、Mabとほぼ同様の高い特異性を有することが確認された。現在、これらscFvの相補性決定部のアミノ酸配列を基盤として、更に低分子量の分子認識モデュールの創製を検討している。
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