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外来遺伝子発現のための組換え蚊の樹立

研究課題

研究課題/領域番号 11680827
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 実験動物学
研究機関大分医科大学

研究代表者

江下 優樹  大分医科大学, 医学部, 助教授 (10082223)

研究分担者 福田 昌子  大分医科大学, 医学部, 助手 (00156788)
松本 顕  九州大学, 大学教育研究センター, 助手 (40229539)
研究期間 (年度) 1999 – 2001
研究課題ステータス 完了 (2001年度)
配分額 *注記
3,700千円 (直接経費: 3,700千円)
2001年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
2000年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1999年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
キーワード病原体耐性蚊 / マリナー遺伝子 / 注入法と電気窄孔法 / IE1プロモーター / GFP / seamless cloning法 / SV40 / バキュロウイルス / 日本産蚊 / mariner / transposase / 転写終結シグナル / actin5C / EGFP / トランスポゾン / 組換え蚊 / 電気窄孔法 / 注入法 / ホーボ遺伝子 / 反復逆配列 / 外来遺伝子の発現
研究概要

遺伝子工学を利用して、病原体耐性蚊を我国で作製するまでの手順を検討した。
1.蚊のマリナー遺伝子の存在
マリナー遺伝子の反復逆配列をprimerとして、マリナー全長の増幅を試みた。その結果、ヤブカのみならず、ハマダラカの中にも増幅する蚊種が認められた。しかし、mariner遺伝子の転移酵素の保存領域をprimerとした場合は、増幅産物はヤブカのみで得られた。これらのことから、ヤブカではトランスポゾンとしてマリナーが働いていることが推察された。
2.注入法による蚊卵の孵化
トランスポゾンの一種であるホーボ遺伝子のDNA、helperであるtransposaseのDNA溶液の混合物を、90分経過後のネッタイシマカ卵に注入して、その後の孵化率を観察した.その結果、注入処理した卵の内約39%が孵化した。また、ヒトスジシマカ卵に注入処理したものでは、いずれも孵化が観察されなかった。蚊卵への注入条件は蚊種によって異なることが示唆された。
3.電気窄孔法による蚊卵の孵化
mariner[actin5C-EGFP]遺伝子を蚊ゲノムに挿入する方法として、注入法と電気窄孔法を検討した。トランスポゾンには、mariner[actin5C-EGFP]DNAとhelper(mariner)DNAの混合液を使用した。ネッタイシマカ卵の孵化はパルス装置では認められた。しかし、ヒトスジシマカ卵の孵化は認められなかった。好適なパルス条件が蚊種で異なることが推察された。
4.蚊由来トランスフアーベクターの作製
蚊由来のトランスポゾンmariner elementを用いて、パキュロウイルス由来のenhancer、IE: promoter、そしてその下流にGFP遺伝子を挿入したvectorを作製した。

報告書

(4件)
  • 2001 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2000 実績報告書
  • 1999 実績報告書
  • 研究成果

    (27件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (27件)

  • [文献書誌] Eshita, Y.: "Vector competence of Japanese mosquitoes against dengue viruses"SP World. No.29. 13-17 (2001)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Uchida, K., Ohmori, D., Ueno, T., Nishizuka, M., Eshita Y., et al.: "Preoviposition activation of cathepsin-like proteinases in degenerating ovarian follicles of the mosquito Culex pipiens pallens"Developmental Biology. 237. 68-78 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Oda, T., Eshita, Y., Uchida, K., Mine, M., Kurokawa, K., et al.: "Reproductive activity and survival of Culex pipiens pallens and Culex quinquefasciatus (Diptera: Culicidae) in Japan at high temperature"J.Med.Entomol.. 39. 185-190 (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Morales, R., Morita, K., Eshita, Y., Tsuda, Y., Fukuma, T., Takagi, M.: "Infection and dissemination of two dengue type 2 viruses isolated from patients exhibiting different disease seventies in orally infected Aedes aegypti from different geographic origin"Med.Entomol.Zool.. 53(in print). (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Eshita, Y., Fukuda, M., Anzal, S., Otsuka, Y., Aoki, C., Takaoka, H., et al.: "Biologia y epidemiologia molecular del mosquito vector del virus del dengue [in Spanish]"Cemadoja Cientifica (Republica Dominicana). 2(in print). (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Eshita, Y., Fukuda, M., Anzai, S., Takaoka, H.Igarashi, A., et al.: "Competencia del mosquito como vector del virus del dengue[in Spanish]"Cemadoja Cientifica (Republica Dominicana). 2(in print). (2002)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 江下優樹, 松本顕: "地球規模での寄生虫対策の時代(分担執筆)別冊・医学のあゆみ"医歯薬出版株式会社. 132 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Eshita, Y.: "Vector competence of Japanese mosquitoes against dengue viruses"SP World. No.29. 13-17 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Uchida, K., Ohmori, D., Ueno, T., Nishizuka, M., Eshita Y., Fukunaga, A. and Kominami E.: "Preoviposition activation of cathepsin-like proteinases in degenerating ovarian follicles of the mosquito Culex pipiens pallens"Developmental Biol.. 237. 68-78 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Oda, T., Eshita, Y., Uchida, K., Mine, M., Kurokawa, K., Ogawa, Y., Kato, K. and Tahara, H.: "Reproductive activity and survival of Culex pipiens pattern and Culex quinquefasciatus (Diptera : Culicidae) in Japan at high temperature"J. Med. Entomol.. 39(1). 185-190 (2002)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Morales, R., Morita, K., Eshita, Y., Tsuda, Y., Fukuma, T., and Takagi, M.: "Infection and dissemination of two dengue type 2 viruses isolated from patients exhibiting different disease severities in orally infected Aedes aegypti from different geographic origin"Med. Entomol. Zool.. (in print).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Eshita, Y., Fukuda, M., Anzai, S., Otsuka, Y., Aoki, C., Takaoka, H., Matsumoto, A., Uchida, K., Igarashi, A., Uchida, Y., Takasaki, T., Yamada, K., y Kurane I.: "Biologia y epidemiologia molecular del mosquito vector del virus del vengue [in Spanish]"Cemadoja Cientifica (Republica Dominicana). (in print).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Eshita, Y., Fukuda, M., Anzai, S., Takaoka. H., Igarashi, A., Uchida, Y., Takasaki, T., Yamada, K., y Kurane I.:: "Competencia del mosquito como vector del virus del dengue [in Spanish]"Cemadoja Cientifica (Republica Dominicana). (in print).

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Eshita, Y., and Matsumoto, A: "Control of vector insects - Development of pathogen-resistant mosquitoes using genetic engineering (in Japanese)"In : The age of parasitic disease control at the global scale, (Editor : Tada, I.), pp98 -103, Ishiyaku Publishers, Inc., Tokyo. (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 江下優樹, 松本 顕: "伝播昆虫の制御:遣伝子工学を用いた病原体耐性蚊の開発"医学のあゆみ. 191・1. 98-103 (1999)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Eshita, Y.: "Vector competence of Japanese mosquitoes against dengue viruses"SP World. No.29. 13-17 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Takaoka, H..Bain, O., UnI, S., Korenaga, M., Tada.K..Ichikawa, H., Otsuka.Y., Eshita.Y.: "Human infection with Onchocerca dewittei japonica, a parasite from wild boar in Oita, Japan"Parasite. 8・3. 261-263 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Uchida, K., Oda T., Matsuoka, H., Moribayashi, A., Ohmori, D., Eshita Y.: "Induction of oogenesis in mosquitoes (Diptera : Culicidae) by Infusion of the hemocoel with amino acids"J.Med.Entomol.. 38・4. 572-575 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Uchida, K., Ohmori, D., Ueuo, T., Nishizuka, M., Eshita Y., et al.: "Preoviposition activation of cathepsin-like proteinases in degenerating ovarian follicles of the mosquito Culex piplens pallens"Developmental Biology. 237. 68-78 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Oda, T., Eshita, Y., Uchida, K., Mine, M., Kurokawa, K., et al.: "Reproductive activity and survival of Culex pipiens pallens and Culex quinquefasciatus (Diptera : Culicidae) in Japan at high temperature"J.Med.Entomol.. 39・1. 185-190 (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Oda,T.,Uchida,K.,Mori,A.,Mine,M.,Eshita,Y.: "Effects of high temperature on the emergence and survival of adult Culex pipiens molestus and Culex pipiens quinquefasciatus in Japan"J.Amer.Mosq.Cont.Assoc.. 15・20. 153-156 (1999)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] 江下優樹,松本顕: "伝播昆虫の制御:遺伝子工学を用いた病原体耐性蚊の開発"医学のあゆみ. 191・1. 98-103 (1999)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] 江下優樹: "研究最前線"大分医科大学学報. 78号. 18-20 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Eshita,Y.: "Vector competence of Japanese mosquitoes against dengue viruses"SP World. No.29. 13-17 (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Takaoka,H.,Bain,O.,Uni,S.,Korenaga,M.,Tada,K.,Ichikawa,H.,Otsuka,Y.,and Eshita,Y.: "Human infection with an Onchocerca species from wild boars in Oita, Japan"Parasite. Vol.7(印刷中). (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Oda,T.,Uchida,K.,Mori,A.,Mine,M.,Eshita,Y.: "Effects of high temperature on the emergence and survival of adult Culex pipiens molestus and Culex pipiens quinquefasciatus in Japan"J.Amer.Mosq.Cont.Assoc.. 15・20. 153-156 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] 江下優樹、松本 顕: "伝播昆虫の制御:遺伝子工学を用いた病原体耐性蚊の開発"医学のあゆみ. 191・1. 98-103 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書

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公開日: 1999-04-01   更新日: 2016-04-21  

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