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ジーンノックアウト法によるヒストン修飾酵素の機能解析に関する共同研究

研究課題

研究課題/領域番号 11694299
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 構造生物化学
研究機関宮崎医科大学

研究代表者

中山 建男  宮崎医科大学, 医学部, 教授 (60031712)

研究分担者 武田 俊一  京都大学, 大学院・医学研究科, 教授 (60188191)
菊池 秀彦  宮崎医科大学, 医学部, 助手 (10301384)
高見 恭成  宮崎医科大学, 医学部, 助教授 (80236356)
研究期間 (年度) 1999 – 2000
研究課題ステータス 完了 (2000年度)
配分額 *注記
8,800千円 (直接経費: 8,800千円)
2000年度: 4,100千円 (直接経費: 4,100千円)
1999年度: 4,700千円 (直接経費: 4,700千円)
キーワードクロマチン / ヒストン / ヒストン修飾酵素 / ジーンノックアウト法 / DT40細胞 / 免疫グロブリン / 細胞増殖 / ヒストンデアセチラーゼ / 転写制御 / DT40株 / クロマチン構造
研究概要

クロマチン構造は様々な要因により多様な動態をとり、ゲノムDNAの関与する多彩な機能発現を制御している。コアヒストンのアセチル基による化学修飾はヌクレオソーム鎖の凝縮、伸長に密接に関与している。本研究課題では、ジーン・ノックアウト法を用いて、アセチル化および脱アセチル化に関与するHATおよびHDACなどの欠損DT40変異株を系統的に作成して解析し、次のような成果を得た。
1、chHDAC-2欠損株におけるH-chain,L-chain量の増大は、その遺伝子近傍のクロマチン構造変化を伴っている可能性が示唆されたため、この構造変化を検討した。H-chain遺伝子のクロマチン構造変化は認められたが、L-chain遺伝子のクロマチン構造変化は認められなかった。また、chHDAC-2はIgM量のコントロールに際して、転写とH-chain pre-mRNAのalternative processing以外の幾つかのステップでも関与している可能性が示唆された。
2、chHDAC-3は細胞増殖に必須であることを明らかにした。したがって、そのconditional homozygous mutantを作成した。また、そのN-末端領域、C-末端領域、核外輸送シグナル(NES)とデアセチラーゼ活性それ自体が必須であることも明らかにした。chHDAC-3は核および細胞質の双方に存在するため、その標的タンパク質としては、コアヒストン以外にも存在することが示唆された。
3、HATに関しては、chGCN5,chP/CAF cDNAのクローニングを終え、さらにそれぞれのホモ変異株を作成済である。さらに、chGCN5は細胞周期関連遺伝子の発現制御を通して、細胞増殖に係っている可能性が示唆された。

報告書

(3件)
  • 2000 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 1999 実績報告書
  • 研究成果

    (21件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (21件)

  • [文献書誌] Takami,Y. et al.: "Histone H1 variants play individual roles in transcription regulation in the DT40 chicken B cell line"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 268. 501-508 (2000)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Takami,Y. et al.: "N-terminal region, C-terminal region, nuclear export signal and deacetylation activity of histone deacetylase-3 are essential for the cell viability of the DT40 chicken B cell"J.Biol.Chem.. 275. 16191-16202 (2000)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ahmad,A. et al.: "Distinct regions of the chicken p46 polypeptide are required for its in vitro interaction with histones H2B and H4 and histone acetyltransferase-1"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 279. 95-102 (2000)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ahmad,A. et al.: "Leucine zipper motif of chicken histone acetyltransferase-1 is essential for in vivo and in vitro interactions with the p48 subunit of chicken chromatin assembly factor-1"Nucleic Acids Res.. 29. 629-637 (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakayama,T.and Takami,Y.: "Participation of histones and histone-modifying enzymes in cell functions through alterations in chromatin structure"J.Biochem.. (in press). (2001)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Takami, Y., Nishi, R.and Nakayama, T.: "Histone H1 variants play individual roles in transcription regulation in the DT40 chicken B cell line."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 268. 501-508 (2000)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Takami, Y.and Nakayama, T.: "N-terminal region, C-terminal region, nuclear export signal and deacetylation activity of histone deacetylase-3 are essential for the viability of the DT40 chicken B cell line."J.Biol.Chem.. 275. 16191-16202 (2000)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ahmad, A., Takami, Y.and Nakayama, T.: "Distinct regions of the chicken p46 polypeptide are required for its in vitro interaction with histones H2B and H4 and histone acetyltransferase-1."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 279. 95-102 (2000)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Ahmad, A., Nagamatsu, N., Kouriki, H., Takami, Y.and Nakayama, T.: "Leucine zipper motif of chicken histone acetyltransferase-1 is essential for in vivo and in vitro interactions with the p48 subunit of chicken chromatin assembly factor-1."Nucleic Acids Res.. 29. 629-637 (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakayama, T.and Takami, Y.: "Histone deacetylase-2 controls the amount of the IgM H-chain at the steps of both transcription and alternative pre-mRNA processing in the DT40 cell line."Current Topics in Biochemical Research. (in press). (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Nakayama, T.and Takami, Y.: "Participation of histones and histone-modifying enzymes in cell functions through alterations in chromatin structure."J.Biochem.. (in press). (2001)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2000 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Takami,Y.: "Histone H1 variants play individual roles in transciption regulation in the DT40 chicken B cell line"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 268. 501-508 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Takami,Y.: "N-terminal region, C-terminal region, nuclear export signal and deacetylation activity of histone deacetylase-3 are essential for the viability of the DT40"J.Biol.Chem.. 275. 16191-16202 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Ahmad,A.: "Distinct regions of the chicken p46 polypeptide are required for its in vitro interaction with histones H2B and H4 and histone acetyltransferase-1"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 279. 95-102 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] AHMAD,A.: "Leucine zipper motif of chicken histone acetyltransferase-1 is essential for in vivo and in vitro interactions with the p48 subunit of chicken chromatin"Nucleic Acids Res.. 29. 629-637 (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Ahamad,A.et al.: "WD repeats of the p48 subunit of chicken chromatin assembly factor-1 required for in vitro interaction"J.Biol.Chem.. 274. 16646-16653 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Takami,Y.et al.: "Chicken histone deacetyase-2 controls the amount of the IgM H-chain at the steps of both transcription"J.Biol.Chem.. 274. 23977-23990 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Takechi,S.et al.: "Sas3 is a histone acetyltransferase and requires a zinc finger motif"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 266. 405-410 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Nakayama,T.et al.: "Interaction of the p48 subunit of chicken chromatin assembly factor-1 with histone deacetylases"Current Topics in Biochemical Research. 1. 173-178 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Takami,Y.et al.: "Histone HI variants play individual roles in transcription regulation in the DT40 chicken B cell line"Biochem.Biophys.Res.Commun.. (in press). (2000)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Takami,Y.et al.: "N-terminal region,C-terminal region,nuclear export signal and histone deacetylase activity of histone"J.Biol.Chem.. (in press). (2000)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書

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公開日: 1999-04-01   更新日: 2016-04-21  

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