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低温域温度応答抗体の開発とそのアフィニティ沈殿法による免疫特異的結合蛋白質の精製

研究課題

研究課題/領域番号 11750685
研究種目

奨励研究(A)

配分区分補助金
研究分野 生物・生体工学
研究機関富山大学

研究代表者

星野 一宏  富山大学, 工学部, 助教授 (20222276)

研究期間 (年度) 1999 – 2000
研究課題ステータス 完了 (2000年度)
配分額 *注記
2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
2000年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
1999年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
キーワード温度刺激応答性高分子 / ヒト免疫グロブリンG / Protein A / 免疫特異的結合蛋白質 / アフィニティ沈殿法 / ヒト免疫グロブリン'G
研究概要

4℃という生化学物質の精製に適した温度でアフィニティ精製を行うことのできる新規な温度応答型抗体を開発し、この抗体を利用するためのバイオプロセスを開発するために、低温域温度応答性高分子(Poly-acryloyl piperazine)を開発し、この高分子体へ多くのIgGのFc領域を結合させたアフィニティ吸着体を調製した。本年度はこの吸着体を可溶状態で使用し、黄色ブドウ状細菌の破砕物から沈澱画分を分離することなく直接細胞壁に存在するProtein Aを吸着させ、温度の上昇により吸着体を不溶化させ、Protein Aを効率よく高純度に精製することを検討した。平成12年度に行った内容を記す。
1)低温域温度応答抗体の調製
昨年度、調整した低温域温度応答型高分子Poly(AP-co-MA)中の側鎖に存在するカルボキシル基と、Papainによる調製したヒト免疫グロブリンG(IgG)のFc領域を水溶性カルボジイミドを用いた酸アミド結合により、低温域温度応答型抗体を調製した。
2)アフニティ吸着体としての性質
調製した低温域温度応答型抗体のProtein Aに対する吸着・解離特性を評価し、本抗体の特性を明らかにする。Protein Aの濃度は酵素免疫測定法(ELISA)により測定した。さらに、抗体に結合したProtein Aの解離方法について検討し、このアフニティ吸着体が繰り返し利用可能であることを示した。
3)アフィニティ沈澱法への利用
低温域温度応答型抗体を利用したアフィニティ沈澱法を開発し、Protein Aの分離・精製の省プロセス化を計った。その結果、4℃の可溶状態においてProtein Aとの吸着を行った後、粗試料溶液の温度を10℃に上昇させることにより不溶化させ、目的物質であるProtein Aを沈殿として回収した。この後、この沈殿に解離剤を添加することによりProtein Aを溶出させ、さらに、低温域温度応答型抗体は再び溶解させことにより再利用可能なプロセスを構築できた。

報告書

(2件)
  • 2000 実績報告書
  • 1999 実績報告書
  • 研究成果

    (6件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (6件)

  • [文献書誌] Kazuhiro Hoshino: "Desorption properties of preadsorbed methal ions from sodium polyacrylate gel"Journal of Chemical Engineering of Japan. 34. (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Kazuhiro Hoshino: "Synthesis of ethyl α-D-glucoside by use of reverse hydrolysis α-D-glucosidase in ethanol"Biotechnology Letters. 23. (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Kazuhiro Hoshino: "Preparation of a New Thermo-Responsive Adsorbent with NAD+ and Its Application to Affinity Precpitation"The 5th Asia-Pacific Biochemical Engineering Conference 1999. 5. 131 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Kazuhiro Hoshino: "Adsorption and Desorption Properties of Metal Ions Using a Sodium Polyacrylate Gel"The 9th International Symposium of Fine Chemistry and Functional Polymers. 9. 337-339 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Kazuhiro Hoshino: "Affinity Preciptitation of Protein A Using a New Thermo-Responsive IgG"Bioseparation. 10. (2000)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書
  • [文献書誌] Kazuhiro Hoshino: "Stimuli Responsive Polymers in Bioprocessing"Hardwood Academic Publishers GMBH, The Netherlands. 458 (2000)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書

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公開日: 1999-04-01   更新日: 2016-04-21  

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