| 研究課題/領域番号 |
11760067
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| 研究種目 |
奨励研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
応用微生物学・応用生物化学
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| 研究機関 | 奈良先端科学技術大学院大学 |
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研究代表者 |
吉田 信行 奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助手 (10273848)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
2000年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1999年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | フルクトシルアミノ酸酸化酵素 / 分裂酵母 / ピペコリン酸 / 1,5-アンヒドログルシトール / 糸状菌 / アルコール脱水素酵素 / 糖尿病 / 臨床診断用酵素 / フルクトシルアミノ酸オキシダーゼ / アスペルギルス属 / 機能改変 / 分子進化 / ピペコリン酸オキシダーゼ / 糖化タンパク |
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| 研究概要 |
1.フルクトシルアミノ酸酸化酵素(FAOD)様タンパクの機能解析
FAODは糖尿病臨床診断に有用な酵素でAspergillus属、Penicillium属の糸状菌に見つかっている。最近、分裂酵母のゲノムプロジェクトでFAODに高い相同性を示すタンパクの存在が示唆された。FAODの生理学的役割を解明する上でこの分裂酵母に存在するFAOD様遺伝子(FLP1)の単離、発現を試みた。PCRによってFLP1を増幅し、大腸菌内でGST-融合タンパクとして発現に成功した。発現したタンパクはFAOD同様に共有結合型のFADを持っていたが、FAODの基質であるアマドリ化合物には作用しなかった。基質について検索したところ、L-ピペコリン酸に高い活性を示した。従って、この分裂酵母のFAOD様タンパクはFAODではなく、リジン代謝に関与するオキシダーゼであることが分かった。
2.1,5-アンヒドログルシトール脱水素酵素(AGDH)遺伝子のクローニングと機能解析
AGDHも我々の研究グループによって発見された糖尿病臨床診断用酵素で糸状菌Trichoderma longibrachiatum 11-3株が生産する酵素である。本菌からAGDH遺伝子の単離を試みた。既に部分配列が分かっていたので、PCRによるギーンウォーキングでAGDH遺伝子をクローニングした。得られた塩基配列から推定されるアミノ酸配列はA.nidulansやNeurospora crassaなどのアルコール脱水素酵素と高い相同性を示した。
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