| 研究概要 |
【目的】申請者は,平成11年度の科学研究費補助金を用い,遺伝子導入の手法でカルシウム依存性プロテインキナーゼII(CaMKll)がコラゲナーゼ(Coll)遺伝子プロモーター活性を抑制することを明らかにした。平成12年度はさらにその抑制機構を明らかにすることを目的とした。
【方法】
1.ヒトCollプロモーター(bp-1,200〜+50)にCATレポーター遺伝子を結合したコンストラクトをGM細胞(CaM Kll遺伝子導入群とベクターのみ導入した群)に遺伝子導入した。24時間後,ホルボールエステル(PMA)でさらに16時間刺激後,CAT活性を測定することで各群間のCollプロモーター活性を比較検討した。
2.Coll遺伝子の-73〜-65bpに存在するactivator protein-1(AP-1)結合部位と-89〜-82bpに存在するPEA領域(Bs蛋白結合領域)をherpes simplex virusのthymidine kinaseプロモーターを介してCATに連結したレポーターコンストラクトを1.と同様にGM細胞に遺伝子導入した。細胞を刺激後,CAT活性を測定し,AP-1とPEA3領域の転写活性を比較検討した。
【結果】
CaMKllはAP-1の転写活性を抑制したが,PEA3の転写活性には影響を与えなかった。したがって,CaMKllのColl遺伝子転写活性抑制効果はAP-1の転写活性を抑制することにより発揮されていることが明らかとなった。
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