| 研究課題/領域番号 |
11770269
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| 研究種目 |
奨励研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
消化器内科学
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| 研究機関 | 東京医科歯科大学 |
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研究代表者 |
黒崎 雅之 東京医科歯科大学, 医学部・附属病院, 助手 (10280976)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
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| 配分額 *注記 |
2,300千円 (直接経費: 2,300千円)
2000年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
1999年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
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| キーワード | インターフェロン / C型肝炎ウイルス / NS5A蛋白 / HCV / NS5A |
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| 研究概要 |
Infectious HCV clone HC-J4由来のNS5A遺伝子を発現ベクターに組み込み、培養肝癌細胞株Huh7に遺伝子導入し、恒常的にNS5A蛋白を発現する細胞Huh7-NS5Aを樹立した。インターフェロン誘導遺伝子のpromoter領域に存在するIFN stimulated response element(ISRE)の下流にルシフェラーゼ遺伝子を組み込んだレポーターベクター用いて、NS5A蛋白がインターフェロンシグナル伝達に及ぼす影響を解析したところ、NS5A蛋白を発現するHuh7-NS5A細胞においてはインターフェロンにより誘導されるルシフェラーゼ活性は抑制されていた。
さらにインターフェロン誘導遺伝子であるISG15遺伝子のpromoter配列をprobeとしたgel shift assayで分析した結果、NS5A蛋白を発現するHUh7-NS5A細胞においてはインターフェロンに対する反応が阻害されていることが明らかとなった。Western blottingによる解析の結果、STAT-1,STAT-2の発現レベルおよびインターフェロン刺激によるSTAT-1のリン酸化は変化していないことから、それより下流のSTAT-1,STAT-2およびp48の複合体であるISGF3の形成、あるいはDNA結合が阻害されることにより、NS5A蛋白のインターフェロンシグナル伝達抑制が生じる可能性が示された。
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