rAVVを用いてのGH欠損症の筋肉および経口遺伝子治療の開発

• 研究課題/領域番号: 11770430
• 研究種目: 奨励研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 小児科学
• 研究機関: 東京慈恵会医科大学
• 研究代表者: 野崎 和之 東京慈恵会医科大学, 医学部, 助手 (80312023)
• 研究期間 (年度): 1999 – 2000
• 研究課題ステータス: 完了 (2000年度)
• 配分額: 800千円 (直接経費: 800千円); 2000年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
• キーワード: 遺伝子治療 / アデノ随伴ウイルス / 成長ホルモン / 下垂体性小人症

研究概要

平成12年度は成長モルモンを発現する組換えアデノ随伴ウイルスを作成した。米国ジエンザイム社よりすでに供与を受けているAAV作成システムを利用した。発現ベクターてあるpNTC3CMVにGHのcDNA組み込んだ。GH遺伝子はCMVプロモーターによりdriveされ、できあがったpNTC3CMV-GHとヘルパーブラスミドであるp5rep_CMVcapを293細胞(胎児腎臓由来細胞株)ヘカルシュウム・リン酸沈殿法によりトランスフェクションした。同時にtempreture sensitive mutantアデノウイルス(Ad5ts149)を感染した。これを39度で培養することによりAd5ts149は増殖せずrAAVのウイルスストックヘのアデノウイルスの混入を防げる。トランスフェクショシ48時間後に細胞と培養液を回収する。回収後、硫酸セルロース・アフィニティークロマトグラフィーにてrAAV-GHを濃縮した(平井幸彦ら、遺伝子治療の基礎技術、羊土社)。濃縮したrAAV-GHをまず培養皮膚線維芽細胞に感染させた。3-4日後に細胞上清中のGHをアマシャム社製のrat GH[^<125>I]アッセイシステムを用いて測定したところGHの発現を確認した。