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遺伝子導入動物作出によるzitterラット突然変異形質の回復試験

研究課題

研究課題/領域番号 11780608
研究種目

奨励研究(A)

配分区分補助金
研究分野 実験動物学
研究機関国立がんセンター

研究代表者

庫本 高志  国立がんセンター, 研究所, 研究員 (20311409)

研究期間 (年度) 1999 – 2000
研究課題ステータス 完了 (2000年度)
配分額 *注記
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
2000年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
1999年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
キーワードzitter / attractin / 中枢神経系 / ミエリン形成不全 / 海綿状脳変成症 / alternative splicing / トランスジェニックラット / 回復試験 / ミュータントラット / 空胞変性 / コンティグ / ゲノムライブラリー
研究概要

Zitterラットは、中枢神経系における空胞変性とミエリン形成異常を呈する。昨年度までに、原因遺伝子であるzitter(zi)を含む約500kbの物理地図を作製し、さらに、物理地図上のAttractin(Atrn)遺伝子が、zitterラット脳では、著しくその発現が減少していることを見い出した。今年度は、zitterラットにおけるAtrn遺伝子の変異の検索、Atrn遺伝子導入ラット作製による回復試験を行った。
正常対照ラットの脳において、Atrn遺伝子は9.0kbと4.4kbのmRNAとして発現していた。ラット脳cDNAライブラリーから全長Atrn cDNAをクローニングした。9.0kbのmRNAは膜貫通ドメインを持つ1432アミノ酸長のタンパク質(膜型アトラクチン)を、4.4kbのmRNAは膜貫通ドメインを持たない1275アミノ酸長のタンパク質(分泌型アトラクチン)をコードしていると予測された。次いで、Atrn遺伝子のエクソン・イントロン構造を決定し、ラットAtrn遺伝子は約120kbにわたる29のエクソンからなること、また、エクソン25でのalternative splicingにより2種類のmRNAに転写されることを明らかにした。zitterラットではイントロン12のsplice donor siteに8塩基対の欠失があり、この欠失がzitter突然変異と考えられた。
Atrnの変異がzitter突然変異であることを確定し、また、両転写産物のうちどちらがzitterラットにおけるミエリン形成不全に係わっているのかを特定するために、正常膜型および分泌型アトラクチンを導入遺伝子として持つzitterラットを作製し、その表現型を観察した。その結果、膜型アトラクチンはミエリン形成不全と空胞変成をレスキューしたが、分泌型はしなかった。
以上の結果より、膜型アトラクチンは中枢神経系のミエリン形成に重要な役割を果たしていることが明らかとなった。

報告書

(2件)
  • 2000 実績報告書
  • 1999 実績報告書
  • 研究成果

    (3件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (3件)

  • [文献書誌] Kuramoto et al.,: "Attractin/Mahogany/Zitter plays a critical role in myelination of the central nervous system."Proceedings of the National Academy Sciences of USA. 98. 559-564 (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Kuramoto et al.,: "Cloning of the rat agouti gene and identification of the rat nonagouti mutation."Mammalian Genome. (in press). (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Kitada et al.,: "Accumulation of N-acetyl-L-aspartate in the brain of the tremor rat, a mutant exhibiting absence-like seizure and spongiform degeneration in the CNS."Journal of Neurochemistry. 74. 2512-2519 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書

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公開日: 1999-04-01   更新日: 2016-04-21  

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