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遺伝子銃を用いた病原体感染シグナル伝達機構に関する研究

研究課題

研究課題/領域番号 11876011
研究種目

萌芽的研究

配分区分補助金
研究分野 植物保護
研究機関奈良先端科学技術大学院大学

研究代表者

平塚 和之  奈良先端科学技術大学院大学, バイオサイエンス研究科, 助教授 (30202279)

研究期間 (年度) 1999
研究課題ステータス 完了 (1999年度)
配分額 *注記
2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
1999年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
キーワード遺伝子銃 / シグナル伝達 / 植物病理学
研究概要

これまでの研究で、ホタルルシフェラーゼ遺伝子(LUC)をレポーターとして用い、形質転換植物あるいは培養細胞を用いた、タバコ病原関連遺伝子PRlaの発現誘導を検出する系を確立している。しかし、これらの形質転換体を用いた系では多種類のプラスミドDNAを同時に導入する必要がある実験を行うことが極めて困難で、転写活性化実験等には適していない。そこで、遺伝子銃によりプラスミドDNAを直接導入し、高感度な遺伝子発現検出系であるウミシイタケルシフェラーゼ(Renilla luciferase)を用いたDual Luciferase Assayによる一過性遺伝子発現解析の実験系について検討した。この実験系ハプロトプラストの調製や、大量のプラスミドDNA精製が不要で、極めて簡便に遺伝子発現実験を実施できる等の利点がある。本研究ではタバコBY-2細胞を用いて、サリチル酸処理や、PR1活性化因子を発現するプラスミドDNAの導入などによるPRlaの発現の変化を解析した。その結果、シロイヌナズナ由来の誘導抵抗性強化遺伝子のゲノムDNA断片を導入し、CaMV35Sプロモーターで発現させることにより、PRlaプロモーター制御下のLUC遺伝子の活性化が認められた。この結果から、一過性実験によっても、当初望まれていたような発現誘導実験が可能であることが示され、今後の研究を展開する上で、非常に有意義な知見を得ることが出来た。さらに、大気圧中で遺伝子導入実験が可能なハンドヘルド型遺伝子銃を用いた高等植物用遺伝子導入系の最適化を試み、良好な実験条件を設定することが出来た。

報告書

(1件)
  • 1999 実績報告書
  • 研究成果

    (1件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (1件)

  • [文献書誌] Ogata et al.: "Mutational analysis of the signal for a naclean localization…"Plant Cell Reports. 19. 101-105 (1999)

    • 関連する報告書
      1999 実績報告書

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公開日: 1999-04-01   更新日: 2016-04-21  

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