前立腺癌造骨性骨転移に関わる形態形成遺伝子群の解析

• 研究課題/領域番号: 11877039
• 研究種目: 萌芽的研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 実験病理学
• 研究機関: 神戸大学
• 研究代表者: 前田 盛 神戸大学, 医学部, 教授 (50030911)
• 研究分担者: 北澤 理子 神戸大学, 医学部, 講師 (00273780) ; 北澤 荘平 神戸大学, 医学部, 助教授 (90186239)
• 研究期間 (年度): 1999 – 2000
• 研究課題ステータス: 完了 (2000年度)
• 配分額: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円); 2000年度: 700千円 (直接経費: 700千円); 1999年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
• キーワード: 前立腺 / 骨形成因子 / 遺伝子プロモータ / メチル化シトシン / Sonic Hedgehog

研究概要

前立腺癌におけるBMP-6の遺伝子発現調節機構について検討した。まず前立腺癌培養細胞株DU-145,LNCap,PC-3,PC-3Mにおいて、Norhtern blotによりBMP-6mRNA発現の差を見い出した。これらの培養細胞にBMP-6遺伝子プロモータを導入しても転写活性は同レベルであり、プロモータ領域のCpGメチル化によってBMP-6遺伝子発現が制御されることを明らかにした。さらに11例の前立腺癌症例についてin situ hybridizationを行い、原発巣と転移巣とにおけるBMP-6,BMP-2mRNA発現を解析した。原発巣において分化度の高い症例ではBMP-2mRNAの発現レベルが高いのに対して、BMP-6mRNAは低分化型腺癌の症例に高率に発現し、他臓器の転移浸潤部位ではBMP-6の発現レベルが高くなる傾向を認めた。BMP-6mRNA発現レベルと対応させて、原発巣および転移巣の標本からmicro dissectionにて腫瘍組織を切り出してBMP-6遺伝子5'側上流領域のCpGメチル化を解析した。原発巣の腫瘍において検出されるBMP-6遺伝子プロモータ領域のSp1結合配列周辺のCpGメチル化が、浸潤転移病巣においては脱メチル化を示していることを明らかにした。このように、腫瘍の増殖・進展の過程で生じるCpGメチル化の変化により付加的な遺伝子発現あるいは遺伝子発現の抑制を来たし、転移浸潤に関わる腫瘍の生物学的特性をもたらす可能性が示唆された。
以上の成果は、英文誌Journal of Bone and Mineral Researchに報告し印刷中である。また、成果の一部は第89回日本病理学会総会ワークショップ、第23回IAP総会シンポジウムにて発表した。

研究成果

• [文献書誌] Kitazawa S et al: "Identification of methylated cytosine from archival formalin-fixed paraffin-embedded specimens."Lab Invest. 80・2. 275-276 (2000)
• [文献書誌] Yano S et al: "Association of decreased calcium-sensing receptor expression with proliferation of parathyroid cells in secondary hypreparathyroidism."Kidney Int. 58・11. 1980-1986 (2000)
• [文献書誌] Takeuchi K et al: "Immunohistochemical detection of PTHrP in a squamous cell carcinoma arising from mature cystic teratoma causinh humoral hypercalcemia of malignancy."Gynecol Oncol. 79・3. 504-507 (2000)
• [文献書誌] 北澤荘平 他: "免疫組織化学とin situ hybridizationのすべて:非放射性プローブ"病理と臨床. 18・臨時増刊号. 245-251 (2000)
• [文献書誌] Sakamoto Y et al: "Methykation of CpG loci in 5'-flanking region alters steady-state expression of adenomatous polyposis gene in colon cancer cell line."J Cell Biochem. (in press).
• [文献書誌] Tamada H et al: "Methylation of CpG island of human bone morphogenetic protein-6 gene promoter alters its steady-state expression in prostatic lesion."J Bone Miner Res. (in press).
• [文献書誌] Kitazawa R et al: "Promoter structure of mouse RANKL/TRANCE/OPGL/ODF gene"Biochemica et Biophysica Acta. 1445・1. 134-141 (1999)
• [文献書誌] Kitazawa R et al: "In situ demonstration of parathyroid hormone-related protein(PTHrP)mRNA in sclerosing hepatic carcinoma"Virchows Arch Int J Pathol. 435・2. 137-142 (1999)
• [文献書誌] Kitazawa S et al: "Transcriptional regulation of rat Cyclin D1 gene by CpG methylation status in promoter region"J Biol Chem. 274・40. 28787-28793 (1999)
• [文献書誌] Kitazawa S et al: "In situ hybridization with polymerase chain reaction-derived single-stranded DNA probe and S1 unclease"Histochem Cell Biol. 111・1. 7-12 (1999)
• [文献書誌] Fujii H et al: "Expression of platelet derived growth factor(PDGF)proteins and their receptor a,b mRNA during fracture healing in normal mouse"Histochem Cell Biol. 112・2. 131-138 (1999)
• [文献書誌] Kitazawa S et al: "Identification of methylated cytosine from archival formalin-fixed paraffin-embedded specimens"Lab Invest. (in press). (2000)