| 研究課題/領域番号 |
11877161
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| 研究種目 |
萌芽的研究
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
精神神経科学
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| 研究機関 | 埼玉医科大学 |
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研究代表者 |
深津 亮 埼玉医科大学, 医学部, 教授 (10113614)
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| 研究分担者 |
続 佳代 札幌医科大学, 医学部, 助手 (60207420)
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| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
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| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
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| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
2000年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
1999年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | アルツハイマー病 / アミロイドβ蛋白 / APP遺伝子 / Aβブレイカー蛋白 / Aβブレイカー蛋白遺伝子 / 遺伝子導入 / マウス腹腔マクロファージ / アルツハイマー病(AD) / アミロイドβ蛋白(Αβ) / Αβブレイカー蛋白 / 遺伝子治療 / 抗Αβブレイカー蛋白抗体 / リポフエクタミン法 |
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| 研究概要 |
本研究の最終目的はAβブレイカー蛋白を脳で発現させてAβの沈着過程を阻害させることによりAD治療に応用することにある。そのために予備的検討を加えて以下の点を明らかにした。
I)遺伝子導入法、ベクター樹立法の検討:
最近の遺伝子治療で用いられることが多いレトロウイルスベクターを用いる方法を検討した。
発現ベクターとしてpDON-AIが最適であることが明らかにされた。
1)Aβブレイカー蛋白を発現するベクターの作成:pDON-AIベクターにAβブレイカー蛋白(すなわちLPFFD)に対するDNAの合成して組み込みに成功した。
2)Aβブレイカー蛋白に対する抗体の樹立:Aβブレイカー蛋白を合成して特異的な多クローン抗体を樹立した。この抗体は、ELISAでは、Aβと反応を示さず極めて特異性が高いことが示された。
II)標的細胞への遺伝子導入法の樹立:
Aβブレイカー蛋白遺伝子レトロウイルスベクターを標的細胞に導入:標的細胞としてヒト抹消血単球、並びにを採取・分離して培養しレトロウイルスベクターの導入を検討した。
III)遺伝子導入標的細胞の性格のin vitroでの検討:
1)Aβブレイカー蛋白遺伝子mRNA発現量の測定:遺伝子導入単球細胞にmRNAが発現されていることをnorthern ELISA法によって確認した。
2)遺伝子導入単球細胞でのAβブレイカー蛋白発現量の測定:遺伝子導入単球細胞を培養して細胞上清、及び細胞ホモジネイトを作成して単クローン抗体を用いたELISAにより検討している。
IV)遺伝子導入標的細胞の性格のin vivoでの検討:
遺伝子導入単球細胞を投与したマウス身体臓器、ならびにマウス脳needle trackにおけるにおけるAβブレイカー蛋白の発現については、特異的な多クローン抗体を用いて現在検討中である。
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