| 研究課題/領域番号 |
11877244
|
|---|
| 研究種目 |
萌芽的研究
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
脳神経外科学
|
|---|
| 研究機関 | 横浜市立大学 |
|---|
研究代表者 |
林 明宗 横浜市立大学, 医学部・附属病院, 助教授 (60285103)
|
|---|
| 研究分担者 |
服部 聡 横浜市立大学, 医学部, 助手 (40275037)
菅野 洋 横浜市立大学, 医学部, 講師 (40244496)
川本 進 横浜市立大学, 医学部, 講師 (80125921)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
1999 – 2000
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
|
| 配分額 *注記 |
2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
2000年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
1999年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
|
|---|
| キーワード | 遺伝子銃 / 脳 / 遺伝子導入 / グリオーマ / 神経細胞 / GFP / lac Z / lacZ |
|---|
| 研究概要 |
2種類の遺伝子銃による遺伝子導入法を検討した。遺伝子銃は、金粒子の表面にDNAを付着させ、ヘリウムガスの圧力で加速し、遺伝子を細胞内に導入する装置である。使用機器は、新型の機械である日本医科機械製PIGG-3と従来型のBiorad製Heliosであり、培養グリオーマ細胞に遺伝子導入を試みた。後者は、ガスが直接対象に衝撃を与えるため、細胞傷害性が強く、最低の圧に設定しても中心部の細胞は、大部分が消失したのに対し、前者では、ガスの圧力がハンマー弾、振動板を介して、金粒子を加速する仕組みなため、細胞傷害性が非常に少ないことがわかった。細胞膜に対する貫通力は後者の方がおとるため、念のため走査電子顕微鏡で調べたところ、細胞内に金粒子が入っていることが確認された。次にこの新型機器を用い、reporter geneとして、GFPまたはlacZをin vitroでグリオーマ細胞、神経細胞に導入し、発現することを確かめた。グリオーマ細胞ではほぼ100%、神経細胞では30%の導入効率であった。また、脳のスライスカルチャーにも導入が確認された。さらに、in vivoの実験ではラットを麻酔下で開頭し、硬膜を除去し、GFPを導入し、発現を確認した。導入による脳表の傷害はほとんど認められなかった。脳のような脆弱な組織に遺伝子銃で遺伝子を導入するためには、PIGG-3は有用な装置であるといえる。
|
