| 研究課題/領域番号 |
11J05494
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| 研究種目 |
特別研究員奨励費
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 国内 |
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| 研究分野 |
構造生物化学
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
伊藤 泰行 大阪大学, 医学系研究科, 特別研究員(DC2)
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| 研究期間 (年度) |
2011 – 2012
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| 研究課題ステータス |
完了 (2012年度)
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| 配分額 *注記 |
1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2012年度: 600千円 (直接経費: 600千円)
2011年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
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| キーワード | IP-39 / ミドリムシ / タイトジャンクション / Claudin / Euglena / IP39 / 構造解析 / Tight junction |
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| 研究概要 |
昨年度より検討中であったIP39の重合により形成される逆平行2重鎖の間をIP39のどの部位が結合を担っているか、この点から解析が始まった。IP39はチロシンがリン酸化修飾を受けることが知られているが、チロシンは細胞内C末鎖にのみ存在する。そこで抗リン酸化チロシン抗体からFab部位を精製してIP39の2次元結晶に作用させて解析を行い、立体構造情報の収集に努めた。Fabが結合した3次元構造は、重合鎖2列の間隙の箇所のみの電子密度が極端に低下しており、他の構造に顕著な変化が見られなかった。これは重合鎖同士を結合する部位にFabが作用したために、構造が不安定になったためと考えられる。つまり、IP39は細胞内C末鎖を介して相互作用する可能性を示唆している。
これまで得られていた構造情報にもデータ収集を重ねることで、この3量体内でIP39が非対称性に配向していることが判明した。1分子と他の2分子は脂質膜中における配向が異なっており、1分子が脂質膜に対して垂直方向軸を回転軸に1800向きを変えて、他の2分子に配向していることが分かった。この構造様式には3量体における相互作用が3種存在する事をしめしており、先述のC末鎖同士の相互作用を含めて、IP39単分子は4種の分子間相互作用を構築できることを示唆している。これらのmulti-interactionがミドリムシ細胞膜表面に見られるIP39の天然性の線状重合鎖構築に寄与していると考えられる。
IP39に見られる分子の並び方は、claudinが構築するTJs-strandの重合様式を示唆している可能性があり、今後のclaudinの機能および構造解析において重要な知見、テンプレートとなると思われる。本研究結果がNature communicationsに発表された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
タイトジャンクションが形成するストランドの分子構築を、クローディン類似蛋白質であるIP-39で示した。ストランド構造の構造解析はこれまでになく、重要な知見が得られた。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後は、解像度の向上などを目指して行きたい。
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