| 研究課題/領域番号 |
12035201
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| 研究種目 |
特定領域研究(A)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
生物系
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| 研究機関 | 聖マリアンナ医科大学 |
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研究代表者 |
中島 利博 聖マリアンナ医科大学, 難病治療研究センター, 助教授 (90260752)
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| 研究分担者 |
深水 昭吉 筑波大学, 応用生物化学系, 教授 (60199172)
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| 研究期間 (年度) |
2000
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| 研究課題ステータス |
完了 (2000年度)
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| 配分額 *注記 |
1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
2000年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
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| キーワード | TAR / RNAヘリケースA / ATPase / RNA / 転写活性化 / 転写統合装置 / RNAポリメラーゼII / RNA結合モチーフ |
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| 研究概要 |
わたしたちはCREB結合タンパク質(CBP)に代表される転写統合装置と呼ばれる分子群の解析をしている。特に、RNAヘリケースA(RHA)がCBPの転写活性化に必要であることを証明した(Cell 1996&1997,G＆D 1997)。HIVの発現調節領域TARに結合する宿主因子TRBP、PKRに保存されているRNA結合モチーフとRHAのそれとの相似性より,私たちはRHAのTAR機能への関与について以下の方法で検証した。
その結果、RHAはそのRNA結合モチーフを介してTARと試験管内、細胞内で結合することが明らかになった。また、同モチーフの236番のリジン残基をグルタミン酸に置換した変異体(K236E)ではTARに対する親和性が有意に低下していることも証明された。さらに、鹿児島大学・馬場昌範教授との共同研究によりHIVの発現をルシフェラーゼアッセイ、ノザン法、またウイルス量をp24の定量法にて測定した結果、野生型RHAはHIVウイルス発現を転写レベルで活性化するが、K236E変異体、およびATPase活性の欠損した変異体ではこの作用が認められなかった。これらの結果をもとに、RHAをATPase/ヘリケース様因子としては最初のTARを介したHIV発現にかかわる宿主因子であることを報告した(FujiiらJ.Biol.Chem.2001)。今後、RHA/TAR複合体機能を詳細に解析することによりHIVの発現制御法の開発への礎としたい。
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