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受精機構におけるユビキチン-プロテアソームシステム

研究課題

研究課題/領域番号 12146201
研究種目

特定領域研究

配分区分補助金
審査区分 生物系
研究機関北海道大学

研究代表者

横沢 英良  北海道大学, 大学院・薬学研究科, 教授 (90012765)

研究分担者 川原 裕之  北海道大学, 大学院・薬学研究科, 助教授 (70291151)
山尾 文明  国立遺伝学研究所, 分子遺伝研究系, 教授 (10158074)
澤田 均  名古屋大学, 大学院・理学研究科, 教授 (60158946)
研究期間 (年度) 2000 – 2004
研究課題ステータス 完了 (2004年度)
配分額 *注記
49,500千円 (直接経費: 49,500千円)
2004年度: 12,400千円 (直接経費: 12,400千円)
2003年度: 12,500千円 (直接経費: 12,500千円)
2002年度: 12,300千円 (直接経費: 12,300千円)
2001年度: 12,300千円 (直接経費: 12,300千円)
キーワードユビキチン / プロテアソーム / 受精 / 卵黄膜 / 発生 / ユビキチンレセプター
研究概要

1.マボヤ卵黄膜蛋白質VC70のユビキチンリガーゼの探索:すでに、マボヤ精子放出液からVC70蛋白質をユビキチン化する分子量700kDaのユビキチン化酵素を単離し、さらに、そのユビキチン化活性を促進するユビキチンリガーゼE3様酵素を、ユビキチン化サイトLys234を含むVC70ペプチドを固定化したカラムを用いたクロマトグラフィーにより単離した。しかし、得られた蛋白質量が微量のために生化学的解析が不可能であったので、上記のVC70ペプチドをベイトに用いて酵母two-hybridスクリーニングを行い、2つのVC70ペプチド結合蛋白質を得た。一つは、UBAドメイン含有蛋白質で、これはVC70蛋白質が酵母内でユビキチン化され、そのポリユビキチン鎖を介して結合蛋白質として得られたと考えられる。一方、マボヤの近縁種であるカタユウレイボヤのESTデータベース検索の結果、もうひとつのクローンは全長ではなく、N末端配列を欠失したものであると推測される。この全長をクローニングし、VC70蛋白質のE3酵素である可能性や受精における役割を明らかにすることが今後の課題である。2.胚特異的ユビキチンレセプターの機能解析:アフリカツメガエルの胚特異的ユビキチンレセプターRpn10cが抗アポトーシス因子Scytheと特異的に結合する。Rpn10cとの結合に関与するScytheのN末端領域を解析し、それがタンデムに連結した4つのユビキチン様ドメインからなり、少なくとも2つのドメインの存在がRpn10cとの結合に必要であることを明らかにした。また、そのドメインがアポトーシス制御に必要であることを明らかにした。Rpn10cを含む胚特異的プロテアソームがScytheを介してどのように発生過程におけるアポトーシスを制御しているかを明らかにすることが今後の課題である。

報告書

(5件)
  • 2004 実績報告書
  • 2003 実績報告書
  • 2002 実績報告書
  • 2001 実績報告書
  • 2000 実績報告書
  • 研究成果

    (23件)

すべて 2005 2004 その他

すべて 雑誌論文 (5件) 文献書誌 (18件)

  • [雑誌論文] Himeic acid : A new ubiquitin-activating enzyme inhibitor isolated from a marine-derived fungus, Aspergillus sp.2005

    • 著者名/発表者名
      Sachiko Tsukamoto
    • 雑誌名

      Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters 15

      ページ: 191-194

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Self/nonself recognition in ascidian fertilization : Vitelline coat protein HrVC70 is a candidate allorecognition molecule2004

    • 著者名/発表者名
      Hitoshi Sawada
    • 雑誌名

      Proceedings of National Academy of Sciences of United States of America 101・44

      ページ: 15615-15620

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Semlp is a novel subunit of the 26S proteasome from Saccharomyces cerevisiae2004

    • 著者名/発表者名
      Takayuki Sone
    • 雑誌名

      Journal of Biological Chemistry 279・27

      ページ: 28807-28816

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] Rpn7 is required for the structural integrity of the 26S proteasome of Saccharomyces cerevisiae2004

    • 著者名/発表者名
      Erika Isono
    • 雑誌名

      Journal of Biological Chemistry 279・26

      ページ: 27168-27176

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [雑誌論文] ユビキチンシステムのメカニズム2004

    • 著者名/発表者名
      佐伯 泰
    • 雑誌名

      医学のあゆみ 211・1

      ページ: 5-11

    • 関連する報告書
      2004 実績報告書
  • [文献書誌] Naoyuki Sakai: "Extracellular ubiquitin system implicated in fertilization of the ascidian, Halocynthia roretzi : Isolation and characterization."Developmental Biology. 264・1. 299-307 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Eri Sakata: "Parkin binds the Rpn10 subunit of 26S proteasomes through its ubiquitin-like domain."EMBO Reports. 4・3. 301-306 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Yayoi Kimura: "N-Terminal modifications of the 19S regulatory particle subunits of the yeast proteasome."Archives of Biochemistry and Biophysics. 409・2. 341-348 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Narudo Kawai: "Regulation of ascidian Rel by its alternative splice variant."European Journal of Biochemistry. 270・22. 4459-4468 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Megumi Yamakami: "Tom 1, a VHS domain-containing protein, interacts with Tollip, ubiquitin, and clathrin."Journal of Biological Chemistry. 278・52. 52865-82872 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Sachiko Tsukamoto: "New polyhydroxy sterols : proteasome inhibitors from a marine sponge Acanthodendrilla sp."Journal of Natural Products. 66・9. 1181-1185 (2003)

    • 関連する報告書
      2003 実績報告書
  • [文献書誌] Hitoshi Sawada: "Extracellular ubiquitination and proteasome-mediated degradation of the ascidian sperm receptor"Proceedings of National Academy of Sciences, USA. 99. 1223-1228 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Hitoshi Sawada: "Localization and roles in fertilization of sperm proteasomes in the ascidian Halocynthia roretzi"Molecular Reproduction and Development. 62. 271-276 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Yuhsuke Kikukawa: "The 26S proteasome Rpn10 gene encoding splicing isoforms : Evolutional conservation of genomic organization in vertebrates"Biological Chemistry. 383. 1257-1261 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Yasushi Saeki: "Ubiquitin-like proteins and Rpn10 play cooperative roles in ubiciuitin-dependent proteolysis"Biochemical and Biophysical Research Communications. 293. 986-992 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Yasushi Saeki: "Identification of ubiquitin-like protein-binding subunits of the 26S proteasome"Biochemical and Biophysical Research Communications. 296. 813-819 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Koji Takada: "Isolation of ubiquitin-E2 (ubiquitin-conjugating enzyme) complexes from erythroleukaemia cells using immunoaffinity techniques"Biochemical Journal. 356・1. 199-206 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Eri Kodama: "cDNA cloning and functional analysis of ascidian sperm proacrosin"Journal of Biological Chemistry. 276・27. 24594-24600 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Hitoshi Sawada: "Extracellular ubiquitination and proteasome-mediated degradation of the ascidian sperm receptor"Proceedings of National Academy of Sciences, USA. 99・3. 1223-1228 (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Eri Kodama: "Spermosin, a trypsin-like protease from ascidian sperm : cDNA cloning, protein structures and functional analysis"European Journal of Biochemistry. 269・2. 657-663 (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Hitoshi Sawada: "Localization and roles in fertilization of sperm proteasomes in the ascidian Halocynthia roretzi"Molecular Reproduction and Development. (印刷中). (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Hiroyuki Kawahara: "Developmentally regulated, alternative splicing of the Rpn10 gene generates multiple forms of 26S proteasomes."EMBO Journal. 19・15. 4144-4153 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Hiroyuki Kawahara: "Inhibiting proteasome activity causes overreplication of DNA and blocks entry into mitosis in sea urchin embryos."Journal of Cell Science. 113・15. 2659-2670 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書

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公開日: 2001-04-01   更新日: 2018-03-28  

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