HIVベクターの開発

• 研究課題/領域番号: 12217142
• 研究種目: 特定領域研究
• 配分区分: 補助金
• 審査区分: 生物系
• 研究機関: 日本医科大学
• 研究代表者: 島田 隆 日本医科大学, 大学院・医学研究科, 教授 (20125074)
• 研究分担者: 塙 秀樹 日本医科大学, 医学部, 助手 (10256977) ; 三宅 弘一 日本医科大学, 医学部, 講師 (90267211)
• 研究期間 (年度): 2000 – 2004
• 研究課題ステータス: 完了 (2004年度)
• 配分額: 55,300千円 (直接経費: 55,300千円); 2004年度: 11,000千円 (直接経費: 11,000千円); 2003年度: 11,100千円 (直接経費: 11,100千円); 2002年度: 11,000千円 (直接経費: 11,000千円); 2001年度: 11,200千円 (直接経費: 11,200千円); 2000年度: 11,000千円 (直接経費: 11,000千円)
• キーワード: 遺伝子治療 / ウイルスベクター / HIVベクター / 挿入変異 / 血管新生 / リンパ腫 / 多発性骨髄腫 / 膵癌 / 血管新生阻害 / エンドスタチン / アンギオスタチン / 白血病 / 非分裂細胞 / 血管新生抑制因子 / 骨髄幹細胞 / アデノウイルスベクター / エイズ / ATL

研究概要

HIVベクターの開発と癌の遺伝子治療の可能性について検討した。
1)HIVベクターの改良:レトロウイルスベクターによる白血病の報告を受け、HIVベクターの挿入変異による細胞の癌化の可能性を低下させるための研究を進めている。HIVベクターの内部プロモーターが周囲の遺伝子を活性化する度合いを測定するアッセイ系を確立し、内部プロモーターとインスレーターの影響を検討した。内部プロモーターとしては、イントロンをもつEF1aのプロモータを逆向きに挿入したベクターが最も周囲への影響が少なかった。また、chicken globin遺伝子のコア・インスレーター(cHS4)を発現ユニットの両側に挿入することで、ベクターのタイターを下げることなく周囲への影響を遮断できることを見出した。
2)癌遺伝子治療法の開発:血管新生抑制作用のあるendostatinをもつウイルスベクターHIV-EndあるいはAAV-Endを作製し癌遺伝子治療の可能性を検討した。EB陽性ヒトリンパ腫細胞の増殖が筋肉内に投与したHIV-Endにより著明に抑制され、生存曲線の改善も認められた。同様にSCIDマウスに移植された多発性骨髄腫細胞の増殖が造血幹細胞に導入したHIV-Endにより著明に抑制されることが明らかした。同所移植の系として、膵癌細胞をハムスターの膵臓に移植し肝臓転移を起こすモデルを作製し、AAV-Endが原発腫瘍の増殖、及び転移の両者に著明な抑制効果をもつことを示した。また、我々が新たに作成した慢性白血病を自然発症するbcr/ablトランスジェニックマウスをモデルとしたendostatinの遺伝子治療の有効性を確認した。

研究成果

• [雑誌論文] Antiangiogenic gene therapy of myeloproliferative disease developed in transgenic mice expressing P230 ber/abl. (2005)
  • 著者名/発表者名: Miyake, K., Inokuchi, K., et al.
  • 雑誌名: Gene Ther. (in press)
• [雑誌論文] Near-triploidy and niar-tetraploidy in hematological malignancies and mutation of the p53 gene. (2004)
  • 著者名/発表者名: Watanabe, A., Inokuchi, K., et al.
  • 雑誌名: Clin.Lab.Haem. 26 ページ: 25-30
• [雑誌論文] HIV vector mediated intra-articular expression of angiostatin inhibits progression of collagen-induced arthritis in mice. (2004)
  • 著者名/発表者名: Kato, K., Miyake, K., et al.
  • 雑誌名: Rheumatol.Int. (in press)
• [雑誌論文] Adeno-associated viral vector mediated expression on endostatin inhibits tumor growth and metastasis in an orthotropic pancreatic cancer model in hamsters. (2004)
  • 著者名/発表者名: Noro, T., Miyake, K., et al.
  • 雑誌名: Cancer Res. 64 ページ: 7486-7490
• [雑誌論文] Lentivirus-mediated expression of angiostatin efficiently inhibits neovascularization in a murine proliferative retinopathy model. (2003)
  • 著者名/発表者名: Igarashi, T., Miyake, K., et al.
  • 雑誌名: Gene Ther. 10 ページ: 219-226
• [雑誌論文] Myeloproliferative diseasein transgenic mice expressing P230 Bcr/Able : longer disease latency, thrombocytosis and mild leukocytosis. (2003)
  • 著者名/発表者名: Inokuchi, K., Dan, K., et al.
  • 雑誌名: Blood 102 ページ: 320-322
• [雑誌論文] Simultaneous novel BCR-ABL gene mutation and increased expression of BCR-ABL mRNA caused clinical resistence in a double Ph-positive acute biphenotypic leukemia. (2003)
  • 著者名/発表者名: Inokuchi, K., Inami, M., et al.
  • 雑誌名: Int.J.Hematol. 78 ページ: 173-175
• [文献書誌] Okino, T., et al.: "Sequential hitopathological changes in vivo after suicide gene therapy of gastric cancer induced by N-methyl-N'-nitro-N-nitroguanidine in rats."Jpn.J.Cancer Res.. 92. 673-679 (2001)
• [文献書誌] Inokuchi, K., et al.: "Loss of DCC gene expression is of prognostic importance in acute myelogenous leukemia."Clinical Cancer Res.. 8. 1882-1888 (2002)
• [文献書誌] Igarashi, T., et al.: "New strategy for in vivo transgene expression in corneal epithelial progenitor cells."Current Eye Res.. 24. 46-50 (2002)
• [文献書誌] Igarashi, T., et al.: "Lentivirus-mediated expression of angiostatin efficiently inhibits neovascularization in a murine proliferative retinopathy model."Gene Ther.. 10. 219-226 (2003)
• [文献書誌] Inokuchi, K., et al.: "Myeloproliferative disease in transgenic mice expressing P230 Bcr/Able : longer disease latency, thrombocytosis and mild leukocytosis."Blood. 102. 320-322 (2003)
• [文献書誌] Watanabe, A., et al.: "Near-triploidy and niar-tetraploidy in hematological malignancies and mutation of the p53 gene."Clin.Lab.Haem.. 26. 25-30 (2004)
• [文献書誌] Inokuchi, K., Yamaguchi, H., Hanawa, H., Tanosaki, et al.: "Loss of DCC gene expression is of prognostic importance in acute myelogenous leukemia"Clinical Cancer Res.. 8. 1882-1888 (2002)
• [文献書誌] Igarashi, T., Miyake, K., Kato, K., Watanabe, A., et al.: "Lentivirus-mediated expression of angiostatin efficiently inhibits neovascularization in a murine proliferative retinopathy model"Gene Ther.. 10. 219-226 (2003)
• [文献書誌] Igarashi, T., Miyake, K., Suzuki, N., Kato, K., et al.: "New strategy for in vivo transgene expression in corneal epithelial progenitor cells"Current Eye Res.. 24. 46-50 (2002)
• [文献書誌] Takahashi, H., Hirai, Y., Migita, M., Seino, Y., et al.: "Long-term systemic therapy of Fabry disease in a knockout mouse by adeno-associated virus-mediated muscle-directed gene transfer"Proc. Natl. Acad. Sci. USA.. 99. 13777-13782 (2002)
• [文献書誌] Tanaka, R., Komine-Kobayashi, M., Mochizuki, H., Yamada, et al.: "Migration of EGFP expressing bone marrow-derived microglia/macrophage into the mice brain following permanent focal ischemia"Neuroscience. (in press). (2003)
• [文献書誌] Sugiyama, O., Orimo, H., Suzuki, S., Yamashita, K., et al.: "Bone formation following tansplantation of genetically modified primary bone marrow stromal cells"J. Orthop. Res.. (in press). (2003)
• [文献書誌] Miyake, K., Shimada, T., et al.: "Selective killing of HIV infected cells by targeted gene transfer and inducible gene expression using a recombinant HIV vector"Hum. Gene. Ther. 12. 227-233 (2001)
• [文献書誌] Sakai, N., Shimada, T., et al.: "Selective transduction of HIV-1 infected cells by the combination of HIV and MMLV vectors"Int. J. Hematol.. 73. 476-482 (2001)
• [文献書誌] Mochizuki, H., Shimada, T., et al.: "An AAV-derived Apaf-1 dominant negative inhibitor prevents MPTP toxicity as antiapoptotic gene therapy for Parkinson's disease"Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98. 10918-10923 (2001)
• [文献書誌] Nakano, K., Shimada, T., et al.: "Differentiation of transplanted bone marrow cells in the adult mouse brain"Transplantation. 71. 1735-1740 (2001)
• [文献書誌] Okino, T., Shimada, T., et al.: "Sequential histopathological changes in vivo after suicide gene therapy of gastric cancer induced by N-nitro in rats"Jpn. J. Cancer Res.. 92. 673-679 (2001)
• [文献書誌] Akasaka, S., Shimada, T., et al.: "Suicide gene therapy for chemically induced rat bladder tumor entailing instillation of adenoviral vectors"Jpn. J. Cancer Res.. 92. 568-575 (2001)
• [文献書誌] Miyake,K.,Shimada,T., et al.: "Selectivekilling of HIV infectedcells by targeted gene transfer and inducible gene expression using a recombinant HIV vector."Hum.Gene Ther.. 112. 227-233 (2001)
• [文献書誌] Nakano,K.,Shimada,T., et al.: "Differentiation of transplanted bone marrow cells in the adult mouse brain."Transplantation. (in press). (2001)
• [文献書誌] Sakai,N.,Shimada,T., et al.: "Selective transduction of HIV-1 infected cells by the combination of HIV and MLV vectors."Inter.J.Hematol.. (in press). (2001)
• [文献書誌] Fujii,I.,Shimada,T., et al.: "Targeted and stable gene delivery into muscle cells by a two-step transfer system."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 275. 931-935 (2001)
• [文献書誌] Satoh,W.,Shimada,T., et al.: "Site-specific integration of an AAV vector plasmid mediated by regulated expression of Rep based on Cre/lox-p recombination."J.Virol.. 74. 10631-10638 (2000)
• [文献書誌] Suzuki,S.and Shimada,T.: "A retroviral vector capable of targeted gene transfer into cells expressing HIV envelope glycoprotein."Biochem.Biophys.Res.Commun.. 271. 672-676 (2000)