クリプトスポリジウム症に対する卵黄抗体を用いた受動免疫療法の確立

• 研究課題/領域番号: 12356009
• 研究種目: 基盤研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 展開研究
• 研究分野: 応用獣医学
• 研究機関: 帯広畜産大学
• 研究代表者: 長澤 秀行 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 教授 (60172524)
• 研究分担者: 小山田 隆 北里大学, 獣医畜産学部, 教授 (80050665) ; 児玉 義勝 (株)ゲンコーポレーション, 所長 ; 井関 基弘 金沢大学, 医学部, 教授 (20047179) ; 玄 学南 (玄 学南(Xuan Xuenan)) 帯広畜産大学, 原虫病研究センター, 助教授 (10292096)
• 研究期間 (年度): 2000 – 2003
• 研究課題ステータス: 完了 (2003年度)
• 配分額: 42,990千円 (直接経費: 35,700千円、間接経費: 7,290千円); 2003年度: 9,490千円 (直接経費: 7,300千円、間接経費: 2,190千円); 2002年度: 9,490千円 (直接経費: 7,300千円、間接経費: 2,190千円); 2001年度: 12,610千円 (直接経費: 9,700千円、間接経費: 2,910千円); 2000年度: 11,400千円 (直接経費: 11,400千円)
• キーワード: 原虫病 / ウイルスベクター / オオシスト / Cryptosporidium parvum / 受動免疫 / 遺伝子組み換え / 感染防御機構 / 卵黄抗体

研究概要

1.クリプトスポリジウム原虫の防御抗原をコードする遺伝子のクローニング
牛あるいは人由来のCryptosporidium parvumオオシストを試料として、前年度に引き続きクリプトスポリジウム特異的抗原遺伝子のクローニング及び塩基配列の解析をおこなった。そのうち、簡易診断法であるELISA抗原を特定し、血清学的診断法を確立し、疫学調査を計画した。
2.ウイルスベクターを用いた遺伝子組み換え体の作成
大腸菌発現タンパクと免疫原性が異なることを期待して、鶏ヘルペスウイルス、マレック病ウイルス、昆虫のバキュロウイルスをベクターとして、クリプトスポリジウム遺伝子の組み換え体を作製した。ワクチン候補としての有用性を確認し、フィールドトライヤルを実施した。
3.クリプトスポリジウム抗原の大量発現・精製
リコンビナント原虫抗原及びクリプトスポリジウム原虫遺伝子組み操えウイルスを大量に発現・精製するシステムを利用し、鶏に免疫するための抗原を充分量確保した。
4.フィールドにおける評価
フィールドにおける牛群に受動免疫をおこない、免疫効果について検討した。その結果、非接種牛群と比較して、受動免疫牛群では明らかな感染防御効果が認められた。
5.国内における牛クリプトスポリジウム症の疫学調査
既に、我が国の河川中にはクリプトスポリジウムオオシストが広範囲に存在する事実を明らかにしている。このオオシストの感染源は牛である可能性が高く、飼育形態と密接に関係している事実を明らかにした。今後、河川中のオオシストが人あるいは牛への感染源となりうるのか、野生動物による感染拡大の可能性、河川中におけるオオシストの生存期間および病原性保持能力等について研究を継続する必要がある。

研究成果

• [文献書誌] Takashima, Y. et al.: "Recombinant bovine herpesvirus-1 expressing p23 protein of Cryptospordium parvum induced neutralizing antibodies in rabbits."J.Parasitol.. 89(2). 276-282 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Tsushima, Y. et al.: "Viability and infectivity of Cryptosporidium parvum oocysts detected in river water in Hokkaido, Japan."J.Vet.Med.Sci.. 65(5). 585-589 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Tsushima, Y. et al.: "Seasonal change in the number of Cryptosporidium parvum oocysts in water samples from the rivers in Hokkaido, Japan, detected by the ferric sulfate flocculation method.rabbits."J.Vet.Med.Sci.. 65(1). 121-123 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nishikawa, Y. et al.: "Characterisation of Toxoplasma gondii engineered to express mouse interferon-gamma."Int.J.Parasitol.. 33(13). 1525-1535 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Nishikawa, Y. et al.: "A role for balance of interferon-gamma and interleukin-4 production in protective immunity against Neospora caninum infection."Vet.Parasitol.. 116(3). 175-184 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Makala, L.H.C.et al.: "Antigen-presentig cell in the gut."J.Biomedical Sci.. 11(2). 130-141 (2004)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Kaneko, Y., Takashima, Y., Xuan, X., Igarashi, I., Nagasawa, H., Mikami, T., Otsuka, H.: "Natural IgM antibodies in sera from various animals but not the cat kill Toxoplasma gondil by activating the classical complement pathway."Parasitology. 128. 123-129 (2004)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Fukumoto, S., Xuan, X., Takabatake, N., Igarashi, I., Sugtmoto, C., Fujisaki.K., Nagasawa, H., Mikami, T., Suzuki, H.: "Inhibitory effect of antiserum to surface antigen P50 of Babesia gibsoni on growth of parasites in severe combined immunodeficiency mice given canine red blood."Infect.Immun.. 72(3). 1795-1798 (2004)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Makala, L.H.C., Nishikawa, Y., Suzuki, N., Nagasawa, H.: "Antigen-presentig cell in the gut."J.Biomedical Sci.. 11(2). 130-141 (2004)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Tanaka, T., Abe, Y., Kim, W-S., Xuan, X., Nagasawa, H., Igarashi, I., Kumura, H., Shimazaki, K.: "The detection of bovine lactoferrin binding protein on Toxoptasma gondii."J.Vet.Med.Sci.. 65(12). 1377-1380 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Fukumoto, S., Xuan, X., Inoue, N., Igarashi, I., Sugimoto, C., Fujisaki, K., Nagasawa, H., Mikami, T., Suzuki, H.: "Molecular charactenzation of a gene encoding a 29-kDa cytoplasmic protein of Babesia gibsoni and evaluation of its diagnostic potentiality."Mol.Biochem.Parasitol.. 131(2). 129-136 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Fukumoto, S., Xuan, X., Kadota, K., Igarashi, I., Sugimoto, C., Fujisaki, K., Nagasawa, H., Mikami, T., Suzuki, H.: "High-level expression of truncated surface antigen P50 of Babesia gibsoni in insect cells by baculovirus and evaluation of its immunogenicity and antigenicity."Clin.Diagn.Lab.Immunol.. Jul;10(4). 596-601 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nishikawa, Y., Xuan, X., Makala, L., Vielemeyerb, O., Joinerb, K.A., Nagasawa, H.: "Characterisation of Toxoplasma gondii engineered to express mouse interferon-gamma."Int.J.Parasitol.. 33(13). 1525-1535 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Nishikawa, Y., Inoue, N., Makala, L., Nagasawa, H.: "A role for balance of interferon-gamma and interleukin-4 production in protective immunity against Neospora caninum infection."Vet.Parasitol.. 116(3). 175-184 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Takashima, Y., Xuan, X., Kimata, I., Iseki, M., Kodama, Y., Nagane, N., Nagasawa, H., Matsumoto, Y., Mikami, T., Otsuka, H.: "Recombinant bovine herpesvirus-1 expressing p23 protein of Cryptosporidium parvum induces neutralizing antibodies in rabbits."J.Parasitol. 89(2). 276-282 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Seng, S., Makala, L.H.C., Maki.Y., Choi, Y., Yokoyama, M., Suzuki, N., Toyoda, Y., Nagasawa, H.: "Unresponsiveness to surface antigen 1 modifies cytokine profiles in acute Toxoplasma gondii infection."Parasitology. 70. 237-246 (2002, 2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Makala, L., Reyes, J.C.S., Nishikawa, Y., Tsushima, Y., Xuan, X., Huang, X., Nagasawa, H.: "A comparison of the phenotype of dendritic cells derived from discrete peyer's patch macrophages of non-infected and Toxoplasma gondii infected mice."J.Vet.Med.Sci.. 65(5). 591-597 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Tsushima, Y., Karanis, P., Kamada, T., Xuan, X., Makala, L., Tonya, Y., Akashi, H., Nagasawa, H.: "Viability and infectivity of Cryptosporidium parvum oocysts detected in river water in Hokkaido, Japan."J.Vet.Med.Sci.. 65(5). 585-589 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Tsushima, Y., Karanis, P., Kamada, T., Xuan, X., Makala, L., Tohya, Y., Akashi, H., Nagasawa, H.: "Seasonal change in the number of Cryptosporidium parvum oocysts in water samples from the rivers in Hokkaido, Japan, detected by the ferric sulfate flocculation method."J.Vet.Med.Sci.. 65(1). 121-123 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Takashima, Y.et al.: "Recombinant bovine herpesvirus-1 expressing p23 protein of Cryptosporidium parvum induces neutralizing antibodies in rabbits"J.Parasitol.. 89(2). 276-282 (2003)
• [文献書誌] Tsushima, Y.et al.: "Viability and infectivity Cryptosporidium parvum oocysts detected in river water in Hokkaido, Japan"J.Vet.Med.Sci.. 65(5). 585-589 (2003)
• [文献書誌] Tsushima, Y.et al.: "Seasonal change in the number of Cryptosporidium parvum oocysts in water samples from the rivers in Hokkaido, Japan, detected by the ferric sulfate flocculation method. rabbits"J.Vet.Med.Sci.. 65(1). 121-123 (2003)
• [文献書誌] Nishikawa, Y.et al.: "Characterisation of Toxoplasma gondii engineerd to express mouse interferon-gamma"Int.J.Parasitol.. 33(13). 1525-1535 (2003)
• [文献書誌] Nishikawa, Y.et al.: "A role for balance of interferon-gamma and interleukin-4 production in protective immunity against Neospora caninum infection"Vet.Parasitol.. 116(3). 175-184 (2003)
• [文献書誌] Makala, L.H.C.et al.: "Antigen-presentig cell in the gut"J.Biomedical Sci.. 11(2). 130-141 (2004)
• [文献書誌] Tsushima, Y. et al.: "Seasonal change in the number of Cryptosporidium parvum oocysts in water samples from the rivers in Hokkaido, Japan, detected by the ferric sulfate flocculation method"J. Vet. Med. Sci.. 65. 121-123 (2002)
• [文献書誌] 更科孝夫等: "「特集:原虫感染と水処理」:健康牛のクリプトスポリジウム汚染の実態調査"用水と排水. 44(4). 19-22 (2002)
• [文献書誌] Makala, L. et al.: "Peyer's Patches : Organized lymphoid structures for the induction of mucosal immune responses in the intestine"Pathobiology. 70. 55-68 (2002)
• [文献書誌] Huang, X. et al.: "Characterization of Toxoplasma gondii SAG2 expressed in insect cells by recombinant baculo virus and evaluation of its diagnostic potential in an enzyme-linked immunosorbent assay"Clin. Diagn. Lab. Immunol.. 9. 1343-1347 (2002)
• [文献書誌] Nishikawa, Y. et al.: "Canine herpesvirus ORF2 is a membrane protein modified by N-linked glycosylation"Virus Res.. 87(1). 1-9 (2002)
• [文献書誌] Tsushima, Y. et al.: "Viability and infectivity of Cryptosporidium parvum oocysts detected in river water in Hokkaido, Japan"J. Vet. Med. Sci.. (in press). (2002)
• [文献書誌] Tsushima, Y. et al.: "Detection of Cryptosporidium parvum oocysts in environmental water in Hokkaido,Japan"J.Vet.Med.Sci.. 63(3). 233-236 (2001)
• [文献書誌] Mishima, M. et al.: "Modified protection against Toxoplasma gondii lethal infection and brain cyst formation by vaccination with SAG2 and SRS1"J.Vet.Med.Sci.. 63(4). 433-438 (2001)
• [文献書誌] Elikira N. et al.: "Serodiagnosis of Toxoplasma gondii infection in cats by enzyme-linked immunosorbent assay using recombinant SAG1"Veterinary Parasitology. 102(1). 35-44 (2001)
• [文献書誌] Mishima, M. et al.: "Construction of recombinant feline herpesvirus type 1 expressing Toxoplasma gondii surface antigen 1"Mol.Biochem.Parasitol.. 117(2). 103-106 (2001)
• [文献書誌] Nishikawa, Y. et al.: "Expression of canine interferon-g by a recombinant vaccinia virus and its antiviral effect"Virus Res.. 75(2). 113-121 (2001)
• [文献書誌] Mishima, M. et al.: "Modified protection against Toxoplasma gondii lethal infection and brain cyst formation by vaccination with SAG2 and SRS1"J.Vet.Med.Sci.. 63(4). 433-438 (2001)
• [文献書誌] Tsushima,T. et al.: "Detection of Cryptosporidium parvum oocysts in environmental water in Hokkaido, Japan."J.Vet.Med.Sci.. (in press). (2001)
• [文献書誌] Nishikawa,Y. et al.: "Immunisation of dogs with a canine herpesvirus vector expressing Neospora caninum surface protein, NcSRS2."Int.J.Parasitol.. 30. 1167-1171 (2000)
• [文献書誌] Nishikawa,Y. et al.: "Protective efficacy of vaccination by recombinant vaccinia virus against Neospora caninum infection."Vaccine. 19. 1381-1390 (2001)
• [文献書誌] Igarashi,I. et al.: "Immunization with recombinant surface antigens p26 with Freund's adjuvants against Babesia rodhaini infection."J.Vet.Med.Sci.. 62. 713-723 (2000)
• [文献書誌] Ikadai,H. et al.: "Protein analysis of Babesia caballi merozoites by two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis and western blotting."J.Vet.Med.Sci.. 62. 323-327 (2000)
• [文献書誌] Nishikawa,Y. et al.: "Delivery of Neospora caninum surface protein, NcSRS2(Nc-p43). to mouse using recombinant vaccinia virus."Parasitol.Res.. 86. 934-939 (2000)