| 研究課題/領域番号 |
12460056
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
食品科学・製品科学
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| 研究機関 | 新潟大学 |
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研究代表者 |
門脇 基二 新潟大学, 農学部, 教授 (90126029)
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| 研究分担者 |
吉澤 史昭 宇都宮大学, 農学部, 助教授 (10269243)
藤村 忍 新潟大学, 農学部, 助教授 (20282999)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
14,300千円 (直接経費: 14,300千円)
2001年度: 5,000千円 (直接経費: 5,000千円)
2000年度: 9,300千円 (直接経費: 9,300千円)
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| キーワード | オートファジー / 肝臓 / タンパク質分解 / アミノ酸 / インスリン / 米タンパク質 / シグナリング / 膜融合 |
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| 研究概要 |
本補助金による研究計画から得られた成果は以下の通りである。
A.オートファジーの栄養生理的役割:
肝臓のin vivoタンパク質分解速度に対する米タンパク質と小麦タンパク質(グルテン)の効果を大豆タンパク質と比較したところ、米タンパク質は大豆の約2倍となり、グルテンは大豆タンパク質とほぼ同等であった。従って、食品タンパク質の質の違いによる肝臓代謝回転の調節が認められた。
B.アミノ酸によるオートファジー形成段階の調節機構の解析
a)肝細胞膜上のアミノ酸'受容体'の検索:予想される'受容体'に対するリガンドとして、ロイシンの誘導体であるLeu-MAPに対してASA化とビオチン化を行い、ASA基と膜タンパク質とをPhotoaffinitylabelingにより結合させ、ビオチン基をアビジン処理樹脂と結合させて標的タンパク質を濃縮している。
b)α-トキシン細胞実験系を用いたアミノ酸作用の細胞内伝達因子の検索:昨年作成のrecombinant α-トキシンの活性は、予想より若干小さなポアサイズ(ATP不透過)であったが、安定した成績を示し、かつ肝臓抽出物の効果を確認出来た。また、抽出物作成ステップのいくつかを改良した。肝臓抽出物は調節アミノ酸(8種)と非調節アミノ酸(12種)、また単独のアミノ酸としてはロイシンで刺激したものを作成し、比較した。調節アミノ酸群はタンパク質分解抑制作用を示し、その活性は抽出物を酢酸エチルで抽出した画分に認められた。
c)アミノ酸の作用機構としてのリン酸化カスケードの可能性:昨年mTOR系の関与は否定されたが、最も下流に位置する候補として、オートファジー膜タンパク質LC3のアミノ酸に対する応答性を調べたところ、LC3のI型からII型への変換がアミノ酸により抑制された。
C.オートファジー成熟段階測定法の開発と調節機樽の解析:
ML画分を用いて、サイトゾル酵素BHMTのフラグメントp32をプローブとして、オートファゴソームとリソソームの膜融合反応の検出とサイトゾルタンパク質の効果を調べている。
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