| 研究課題/領域番号 |
12460090
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
水産化学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
村上 昌弘 東京大学, 大学院・農学生命科学研究科, 助教授 (70134517)
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| 研究分担者 |
満谷 淳 福山大学, 工学部・海洋生物工学科, 助教授 (80309632)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
4,100千円 (直接経費: 4,100千円)
2001年度: 4,100千円 (直接経費: 4,100千円)
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| キーワード | アオコ / 溶藻細菌 / 溶藻・殺藻物質 / 藍藻 / 富栄養化 / Microcystis / Anabaena / Oscillatoria / 溶藻細胞 / Pseudomonas / β-carbolin / microginin / ペプチド |
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| 研究概要 |
夏場湖沼において発生するアオコは景観的にも環境衛生的にも大きく問題となっている。より環境に負荷の少ないアオコの防除法を確立するために淡水産藍藻を殺滅する細菌を単離し、その産生する殺藻物質の構造を明らかにすることを目的とした。
まず、0.5%カシトンCB寒天培地上に形成したコロニーを、藍藻Anabaena cylindrica(NIES-19)を生育させたCB寒天培地上に上野不忍池、および九段下皇居外堀の表層水を接種し、プラーク形成能の有無で殺藻活性を評価した。約8000コロニーを上記のアッセイに付し、16株の殺藻細菌が得られた。16SrDNAの配列を解析した結果、そのうち9株がPseudomonas属の細菌であった。
このうち、最も活性の強かったPseudomonas sp. Q44-1株を0.5%カシトンCB培地で3日間培養し、殺藻物質の単離を試みた。活性物質の構造はFABMSおよびNMRなどの機器分析により決定し、既知化合物の1-methyl-β-carbolineであると同定された。1-methyl-β-carbolineをペーパーディスク法による殺藍藻活性試験に付したところ30μg/diskで殺藻活性を示した。
また、二次スクリーニングで脂溶性および水溶性画分に活性の見られたPaenibacillus sp. S4株について、ワックスマン寒天培地上で固体培養を行った。5Lの培養寒天を凍結乾燥後、粉末状にし、2LのMeOHで3回抽出を行った。MeOH抽出物を減圧濃縮後、H_2O/EtOAcで二層分配を行い、さらに活性の見られたH_2O画分を等量のn-BuOHで抽出した。得られたn-BuOH画分をODSカラムクロマトグラフィーに付し、活性の見られた80%MeOH画分から、ODSを用いた逆相HPLCにより既知化合物であるpermetin AおよびYM-28160をそれぞれ3.5および4.4mg得ることが出来た。Permetin AおよびYM-28160の同定は加水分解物のアミノ酸分析、HRFABMS、各種NMRスペクトルデータの解析によって行った。Permetin AおよびYM-28160は藍藻類A.cylindrica、 O.agardhii、 M.aeruginosa、 M.viridisに対して、30μg/diskで活性を示した。一方緑藻類C.vulgarisとC.tetragamaに対しては30μg/diskで活性を示さなかった。
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