| 研究課題/領域番号 |
12470126
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
消化器内科学
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
武藤 弘行 自治医科大学, 医学部, 講師 (50322392)
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| 研究分担者 |
佐藤 貴一 自治医科大学, 医学部, 講師 (50275707)
菅野 健太郎 自治医科大学, 医学部, 教授 (60179116)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
4,600千円 (直接経費: 4,600千円)
2001年度: 4,600千円 (直接経費: 4,600千円)
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| キーワード | セクレチン / 消化管ホルモン / 分化 / 増殖 / 転写因子 / 細胞周期 / サイクリン / サイクリン依存性キナーゼ |
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| 研究概要 |
消化管ホルモンであるセクレチンを分泌する腸管内分泌細胞は小腸粘膜のうち、分化した増殖能を持たない絨毛においてのみセクレチンを発現している。このことは、細胞増殖の盛んな小腸陰窩においては、細胞の増殖を正に制御する蛋白質がセクレチン遺伝子の転写を抑制することが考えられた。
(1)そこで、細胞周期のG1期に関与するcyclin D1がセクレチン遺伝子の転写に関する影響を検討したところ、cyclin D1はセクレチン遺伝子の転写を抑制することがLuciferase reporter assayにより確認された。しかし、cyclin D1のパートナーであるCyclin Dependent Kinase(Cdk4とCdk6)の発現ベクターをもちいた実験によりCdk4もCdk6もセクレチン遺伝子の転写活性化に関与していないことが確認された。また、Cdk4/6の結合領域を欠損させたcyclin D1であるD1-KEを用いて、Cdk4/6がセクレチンの転写に関与するか否かを検討したところ、D1-KEはCyclin D1と同様にセクレチン遺伝子のプロモーター活性を抑制した。また、cyclin D2、D3および他のG1cyclinであるcyclin Eはセクレチン転写活性能に影響しなかった。
(2)次にcyclin D1のセクレチン遺伝子の転写抑制が、cyclin D1と、セクレチン遺伝子の転写活性化に関与する転写因子BETA2や転写coactivator p300との結合によるものか否かを検討した。in vivoにおいてBETA2とCyclin D1は結合したが直接の結合ではなく、転写coactivator p300を介していた。Cyclin D1はp300のC terminalに結合した。この結合部位はBETA2のp300への結合部位よりC terminal寄りであった。
以上よりセクレチン分泌細胞の分化を抑制するメカニズムとしてCyclin D1が関与しており、転写coactivatorであるp300を介していることが確認された。
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