| 研究課題/領域番号 |
12470218
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
内分泌学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
飯利 太朗 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (90313022)
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| 研究分担者 |
大西 洋英 東京大学, 医学部・附属病院, 助手 (00313023)
本倉 徹 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (00192823)
藤田 敏郎 東京大学, 医学部・附属病院, 教授 (10114125)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
11,500千円 (直接経費: 11,500千円)
2001年度: 5,000千円 (直接経費: 5,000千円)
2000年度: 6,500千円 (直接経費: 6,500千円)
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| キーワード | G蛋白質 / レセプター / 分子機構 / G蛋白質病 / 遺伝子治療 |
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| 研究概要 |
1)G蛋質病の分子メカニズムの解明:G蛋白質解析のモデル疾患である偽性副甲状腺機能低下症Type laで新たに発見されたGDP結合部位のA366近傍に4残基が負荷された変異(表現型として下痢を合併する)を解析した。(a)結合するGDPの放出速度は約20倍に亢進。(b)タンパク質としては不安定。(c)細胞内では、発現量が少なく、わずかな機能亢進を示す。(d)細胞特異的に局在と機能が制御されており、結果下痢を呈する。
2)レセプターによるG蛋白質の活性化機構の解明:レセプターがβγを用いてGαを活性化するモデル(Nature、394:35-38,1998)を検証した。Gα・βγ相互作用部位の変異体を作製したところ、レセプターによって高次構造が変化すると推定される部位のGα変異がレセプター刺激を模しβγ存在下で自らを活性化すること見出した。
3)シグナルの解析・制御ツールとしての変異体G蛋白質のデザインと解析: (a)レセプターを標的としてレセプターによるG蛋白質の活性化を阻害するドミナントネガティブGα変異体、およびβγを標的としてその作用を阻害する同Gα変異体を作製した。
(b)各G蛋白質の下流シグナルを萌らかにする目的で各Gαのドミナントポジテイプ変異体をデザインした。
4)遺伝子導入:(a)遺伝子治療の初段階として、上記変異体等を遺伝子導入しスクリーニングするため、簡便なアデノウイルスを用いた遺伝子導入法を開発、作動を確認した。
(b)これを応用し、レセプターとG蛋白質の共役の特異性と薬物作用を解析する簡便な再構成法を開発した。
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