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N-アセチルグルコサミン-6硫酸化の生物学的意義

研究課題

研究課題/領域番号 12480187
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 機能生物化学
研究機関名古屋大学

研究代表者

村松 喬  名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (00030891)

研究分担者 村松 寿子  名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 講師 (50182134)
門松 健治  名古屋大学, 大学院・医学系研究科, 助教授 (80204519)
黒澤 信幸  富山大学, 工学部, 助教授 (50241253)
研究期間 (年度) 2000 – 2002
研究課題ステータス 完了 (2002年度)
配分額 *注記
14,400千円 (直接経費: 14,400千円)
2002年度: 4,500千円 (直接経費: 4,500千円)
2001年度: 4,100千円 (直接経費: 4,100千円)
2000年度: 5,800千円 (直接経費: 5,800千円)
キーワードスルホトランスフェラーゼ / N-アセチルグルコサミン / L-セレクチン / 血液凝固 / オリゴ糖合成 / 糖タンパク質 / L-セレクチンリガンド / スルフォトランスフェラーゼ / リンパ球ホーミング / 癌性糖鎖 / セレクチン / ルウィスX / 糖鎖抗原 / 糖鎖生物学 / 糖鎖識別
研究概要

N-アセチルグルコサミン-6-スルスルホトランスフェラーゼ(GlcNAc6ST)の3種の酵素、すなわちGlcNAc6ST-1、GlcNAc6ST-2、GlcNAc6ST-3を発現させて特異性を比較した。
GlcNAc6ST-1はGlcNAc6ST-2と同様にムチン型コア2糖鎖(GlcNAcβ1-6[Galβ1-3]GalNAc)に働き、両酵素の間に大きな差はなかった。GlcNAc6ST-2はリンパ球ホーミングに関与することが判明しているが、GlcNAc6ST-1については不明である。そこで、GlcNAc6ST-1とフコシルトランスフェラーゼVIIとの二重トランスフェクションを行い、トランスフォームされた細胞がL-セレクチン発現細胞のローリングを引き出すことを見出した。GlcNAc6ST-3はコア2糖鎖にのみ作用するという特異な性質を示した。いっぽう、GlcNAc6ST-2のみがコア3糖鎖(Galβ1-3GalNAc)に作用した。この特異性から、GlcNAc6ST-2が粘液性大腸癌に新たに発現してくる酵素であると結論し、この点はRT-PCRによって確立された。
ヒトGlcNAc6ST-1をプロテインAとの融合タンパク質としてTn5細胞でバキュロウイルス系で発現した。精製した組み換え酵素は6硫酸化オリゴ糖の合成、さらにタンパク質に結合したオリゴ糖のN-アセチルグルコサミン残基を6硫酸化する試薬として有効であった。
GlcNAc6ST-1遺伝子のノックアウトマウスを作成した。このマウスのGlcNAc6ST-1が完全に欠失していることは、サザンブロッティングとノーザンブロッティングで確認した。ノックアウトマウスは正常に生まれ、目立った異常は示さなかった。現在バッククロスを重ねており、リンパ球ホーミング能との関連について解析を急いでいる。

報告書

(4件)
  • 2002 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2001 実績報告書
  • 2000 実績報告書
  • 研究成果

    (18件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (18件)

  • [文献書誌] Kenji Uchimura: "Specificities of N-acetylglucosamine-6-O-sulfotransferases in relation to L-selectin ligand synthesis and tumor-associated enzyme expression."The Journal of Biological Chemistry. 277. 3979-3984 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kenji Uchimura: "Functional analysis of the chondoroitin 6-sulfotransferase gene in relation to ymphocyte subpopulation, brain development and oversulfated chondroitin sulfates"The Journal of Biological Chemistry. 277. 1443-1450 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Akiko Kanamori: "Distinct sulfation requirements of selectins disclosed using cells that support rolling mediated by all three selectins under shear flow"The Journal of Biological Chemistry. 277. 32578-32586 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Fathy M.El-Fasakhany: "N-Acetylglucosamine-6-sulfotransferase-1 : production in the baculovirus system and its applications to the synthesis of a sulfated ollgosaccharide and to the modification of oligosaccharides in fibrinogen"Journal of Biochemistry. (in press).

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kenji Uchimura et al.: "Specificities of N-acetylglucosamine-6-O-sulfotransferases in relation to L-selectin ligand synthesis and tumor-associated enzyme expression"The Journal of Biological Chemistry. 277. 3979-3984 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kenji Uchimura et al.: "Functional analysis of the chondoroitin 6-sulfotransferase gene in relation to ymphocyte subpopulation, brain development and oversulfated chondroitin sulfates"The Journal of Biological Chemistry. 277. 3979-3984 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Akiko Kanamori et al.: "Distinct sulfation requirements of selectins disclosed using cells that support rolling mediated by all three selectins under shear flow"The Journal of Biological Chemistry. 277. 32578-32586 (2002)

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Fathy M., El-Fasakhany et al.: "N-Acetylglucosamine-6-sulfotransferase-1: production in the baculovirus system and its applications to the synthesis of a sulfated oligosaccharide and to the modification of oligosaccharides in fibrinogen"Journal of Biochemistry. in press.

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Kenji Uchimura: "Specificities of N-acetylglucosamine-6-O-sulfotransferases in relation to L-selectin ligand synthesis and tumor-associated enzyme expression"The Journal of Biological Chemistry. 277. 3979-3984 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Kenji Uchimura: "Functional analysis of the chondoroitin 6-sulfotransferase gene in relation to lymphocyte subpopulation, brain development and oversulfated chondroitin sulfates"The Journal of Biological Chemistry. 277. 1443-1450 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Akiko Kanamori: "Distinct sulfation requirements of selectins disclosed using cells that support rolling mediated by all three selectins under shear flow"The Journal of Biological Chemistry. 277. 32578-32586 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Fathy M.El-Fasakhany: "N-Acetylglucosamine-6-sulfotransferase-1 : production in the baculovirus system and its applications to the synthesis of a sulfated oligosaccharide and to the modification of oligosaccharides in fibrinogen"Journal of Biochemistry. (in Press).

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Kenji Uchimura: "Specificities of N-Acetylglucosamine-6-O-sulfotranferases in Relation to L-selectin Ligand Synthesis and Tumor-associated Enzyme Expression"The Journal of Biological Chemistry. Vol.277 No.6. 3979-3984 (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Kenji Uchimura: "Fuctional Analysis of the Chondrotin 6-Sulfotransferase Gene in Relation to Lymphocyte Subpopulations, Brain Development, and Oversulfated chondroitin Sulfates"The Journal of Biological Chemistry. Vol.277 No.2. 1443-1450 (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Kazuhiro Ishiguro: "Syndecan-4-Deficiency Leads to High Mortality of Lipopolysaccharide-injected Mice"The Journal of Biological Chemistry. Vol.276 No.50. 47483-47488 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Uchimura K et al.: "Diversity of N-acctylglucosamine-6-O-sulfotransferases : molecular cloning of a novel enzyme with different distribution and specificities."Biochem.Biophy.Res.Common.. 274. 291-296 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Zou K et al.: "A heparin-binding growth factor, midkine, binds to a chondroitin sulfate proteoglycan, PG-M/versican."Eur.J.Biochem.. 267. 4046-4053 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Chen G et al.: "A novel variant form of murine β-1,6-N-acetylglucosaminyl transferase forming branches in poly-N-acetyllactosamines."Glycobiology.. 10. 1001-1011 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書

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公開日: 2000-04-01   更新日: 2016-04-21  

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