| 研究課題/領域番号 |
12556001
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
育種学
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| 研究機関 | 北海道大学 |
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研究代表者 |
三上 哲夫 北海道大学, 大学院・農学研究科, 教授 (50133715)
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| 研究分担者 |
田中 征勝 独立行政法人農業技術研究機構, 北海道農業研究センター, 室長
貴島 祐治 北海道大学, 大学院・農学研究科, 助教授 (60192556)
久保 友彦 北海道大学, 大学院・農学研究科, 講師 (40261333)
池口 正二郎 ホクレン農業総合研究所, 植物工学科, 主任研究員
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2003
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| 研究課題ステータス |
完了 (2003年度)
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| 配分額 *注記 |
13,400千円 (直接経費: 13,400千円)
2003年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
2002年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
2001年度: 2,700千円 (直接経費: 2,700千円)
2000年度: 6,200千円 (直接経費: 6,200千円)
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| キーワード | テンサイ / Owen型細胞質雄性不稔 / 稔性回復遺伝子 / RfX / ポジショナルクローニング / BACライブラリー / AFLPマーカー / BACコンティグ / 稔性回復核遺伝子 / BACクローン / PPRモチーフ / ミトコンドリア局在性 / コンティグ / RfX遺伝子 / 共優性マーカー / TAIL PCR / X遺伝子 / 細胞質雄性不稔性 / AFLP / RFLP |
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| 研究概要 |
1.テンサイOwen型雄性不稔細胞質に働く稔性回復遺伝子RfXのポジショナルクローニングを目的として、RfXに連鎖する分子マーカーの設定を試みた。先ずRfXを挟む2種類のRAPDマーカーを得た。さらに、2721種のAFLPプライマー組み合わせを用いて、RfXと緊密に連鎖する8種のAFLPマーカーを得ることができた。このうち、3種のマーカーはRfXとの完全連鎖を示す。
2.RfXをホモ接合型でもつ稔性回復系統を用いて、BACライブラリーを構築した。平均インサート長は97.8kbである。このライブラリーは32180クローンからなり、テンサイ核ゲノムサイズ(758Mb)の約3.4倍に相当する。
3.RfX近傍のAFLPマーカーを超点として、物理地図を作成した。これらのマーカーに対応する8種のBACクローンを選抜し、クロモソームウォーキングにもとづいて、RfX座を含むBACコンティグを完成した。
4.コンティグの長さは800kbにも及ぶので、コンティグからCAPSおよびPCRマーカーを作出し、RfX座領域の絞り込みを図った。雄性不稔型の分離集団から、RfX近傍で遺伝的組換えを生じた13個体を選び出し、genotypingによってRfX座を300kb領域にまで限定することができた。
5.この300kb領域には、葯組織で発現し、しかもミトコンドリア局在が予想されるORFが複数含まれていることが分かった。RfX候補配列として注目される。
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