| 研究課題/領域番号 |
12557052
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 展開研究 |
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| 研究分野 |
消化器内科学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
小池 和彦 東京大学, 医学部・附属病院, 助教授 (80240703)
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| 研究分担者 |
藤江 肇 東京大学, 医学部・附属病院, 助手
新谷 良澄 東京大学, 医学部・附属病院, 助手
森屋 恭爾 東京大学, 医学部・附属病院, 講師 (00272550)
石橋 光太郎 第一製薬中央研究所, 試験研究センター, 主任研究官
松浦 善治 大阪大学, 微生物病研究所, 教授
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
3,700千円 (直接経費: 3,700千円)
2001年度: 3,700千円 (直接経費: 3,700千円)
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| キーワード | C型肝炎 / プロテイン・トランスダクション / プロテアーゼ / トランスジェニックマウス / カスパーゼ |
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| 研究概要 |
ヒト免疫不全ウイルスのTAT蛋白のうち、N末端の11アミノ酸であるprotein transducing domain (ptd)に融合させた各種蛋白は、マウスへの腹腔内投与によって全身の臓器に分布される。Ptd配列の後ろに、C型肝炎ウイルス(HCV)のNS3プロテアーゼによって切断されるペプチドを介在させてカスパーゼ3に結合させることによってHCV感染細胞でのみカスパーゼ3が活性化され、細胞死をもたらすことが可能となる。HCVの感染していない細胞ではNS3プロテアーゼが存在しないため、カスパーゼ3は活性化されず細胞は障害されない。インターフェロン治療によってHCV感染肝細胞が高度に減少するも撲滅されていない患者に、本ポリペプチドを投与することによって、HCV感染肝細胞を排除して慢性C型肝炎を治癒させることが可能である。
カスパーゼ3発現コンストラクトpTAT-Casp3-NS3pcsを以下のごとく作成した。HIV-1のTAT蛋白のうちprotein transducing domain (ptd)を、カスパーゼ3のPro領域を取り除いた部分に結合する。これにNS3プロテアーゼ切断領域(NS3-NS4A境界)配列を挟んでカスパーゼ3のp17、さらにNS3プロテアーゼ切断領域(NS4B-NS5A境界)配列を挟んでp12を発現する。これを大腸菌に発現させ精製した。
一方、我々はHCVのNS3プロテアーゼを肝で発現しているHCV非構造領域遺伝子(NS)トランスジェニックマウスを樹立した。このマウス肝では、NS2からNS5BまでのHCVタンパクが低レベルに発現しており、C型肝炎ウイルス増殖の基礎モデルとなっている。プロテイン・トランスダクションによるC型肝炎治療法開発のため、このマウスモデルにptd結合カスパーセ・ペプチドを投与している。
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