| 研究課題/領域番号 |
12557188
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(B)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 応募区分 | 展開研究 |
|---|
| 研究分野 |
矯正・小児・社会系歯学
|
|---|
| 研究機関 | 鹿児島大学 |
|---|
研究代表者 |
伊藤 博夫 鹿児島大学, 歯学部, 助教授 (40213079)
|
|---|
| 研究分担者 |
中島 敏博 化学及血液療法研究所, 主任研究員
五月女 さき子 鹿児島大学, 歯学部附属病院, 助手 (20325799)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2000 – 2002
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2002年度)
|
| 配分額 *注記 |
12,200千円 (直接経費: 12,200千円)
2002年度: 2,900千円 (直接経費: 2,900千円)
2001年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
2000年度: 6,800千円 (直接経費: 6,800千円)
|
|---|
| キーワード | 歯周病 / 成人性歯周炎 / Porphyromonoas gingivalis / 免疫 / ワクチン / 線毛 / モノクローナル抗体 / ファージ・ディスプレイ・ペプチドライブラリー / Porphyromonas gingivalis / ファージディスプレイ・ペプチドライブラリー / ファージ・ディスプレイ・ペプチドライプラリー |
|---|
| 研究概要 |
Porphyromonas gingivalis (Pg)は成人性歯周炎の原因菌として最重要視されており、本菌の線毛はその組織定着因子であることが示されている。本研究は、Pgの上皮細胞への付着を抑制できる抗体を誘導し得るような合成ワクチンの創製の可能性を探索することを目的とした。最初に、Pg線毛に対するマウスモノクローナル抗体(mAb)を作成し、菌の付着を抑制するmAbは線毛重合体の高次構造を特異的に認識することが示唆された。次いで、M13バクテリオファージのgp3遺伝子内に18merのランダムペプチドを組み込んだファージディスプレイペプチドライブラリーを構築した。前述のmAbとの反応性を指標にスクリーニングを行い、mAbに認識される線毛の立体構造を模倣すると考えられるペプチドのアミノ酸配列(エピトープ)を同定した。当該ファージクローンを大量調整し、ファージ粒子をマウスに投与したところ、挿入ペプチドTagおよび天然Pg線毛に対する抗体の誘導が可能であった。挿入ペプチドの立体構造の安定化による免疫原性の改善を期待して、当該配列を環状ペプチドとして表現するファージ構築に取り組んだ。当ペプチドをそのまま化学的に合成することは不可能であったので、エピトープに関係性の低い配列を削除し、可溶性の環状ペプチドとしての合成にも取り組んだ。しかしながら環状ペプチドとmAbとの結合は認められなかった。このような、ファージ表面に発現される機能性ペプチドとして選択されてきた配列でも、単独のペプチドとしては発現されなかったり、発現はしても機能を発揮できない例が報告されている。その一例に有効性が報告された、大腸菌のマルトース結合タンパク質(MBP)の融合体としての発現系を当ペプチドに適用すべくMBP遺伝子をクローニングし、新たなベクターを構築し、上記の18mer直鎖状ペプチドと11mer環状ペプチドのMBP融合体を作製したところ、直鎖状ペプチド-MBP融合体は可溶性タンパク質として発現することができ、mAbとも特異的な結合が確認された。
|
