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C型肝炎ウイルスの複製酵素と複製を標的とした阻害剤のデザイン開発

研究課題

研究課題/領域番号 12558084
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分展開研究
研究分野 分子生物学
研究機関金沢大学

研究代表者

村上 清史  金沢大学, がん研究所, 教授 (90019878)

研究分担者 草川 貴史  北斗科学産業株式会社, 研究員
林 直之  金沢大学, がん研究所, 助手 (50253456)
大藤 努  北斗科学産業, 研究院
野村 孝弘  金沢大学, がん研究所, 助教授 (80115261)
研究期間 (年度) 2000 – 2002
研究課題ステータス 完了 (2002年度)
配分額 *注記
13,700千円 (直接経費: 13,700千円)
2002年度: 4,100千円 (直接経費: 4,100千円)
2001年度: 4,100千円 (直接経費: 4,100千円)
2000年度: 5,500千円 (直接経費: 5,500千円)
キーワードHCV NS5B / アラニンスキャニング / RNA依存RNA合成酵素(RdRP) / 鋳型 / プライマー結合 / HCV複製 / NS5A / オリゴマー / ヌクレオリン / RNA複製 / RdRP活性 / アラニンスキャンニング
研究概要

HCVの持続感染の遮断が肝がん発症のリスクを低下させると期待される。HCVは宿主とは異なるRNA複製過程があり、RNA依存RNA合成酵素(RdRP)であるNS5BはHCV複製遮断の有力な標的である。HCV複製の阻止を目標に、HCVNA5Bの構造と機能の検討を行った。我々は、1)集約型と点置換アラニン変異を系統的に導入し、NS5BのRdRP活性に必須である5アミノ酸残基を新たに特定した。RdRP活性には鋳型結合能は要求せず、鋳型/primer結合能を要求した(Hepatol., 2001)。2)NS5Bがhomomericにオリゴマー化することを見い出し、オリゴマーに必須な2残基を特定した。各種置換変異による解析から、この2残基の交換が可能である結果を得た(J.Biol Chem., 2002)。3)NS5BとNS5Aの特異的結合を見い出し、集約型アラニン置換変異NS5Bによる解析から4配列がNS5A結合に必要な領域と限定し、NS5AがNS5BのRdRP活性を修飾することを見い出した(J.Biol.Chem., 2002)。4)ヌクレオリンと全長型NS5Bの膜構造での共局在を見い出した。相互作用はヌクレオリンのC端側の領域と、NS5Bでは2つの領域に限定された。ヌクレオリン結合欠損のNS5Bの変異で、全長NS5Bとヌクレオリンの共局在は観察されなかった(J.Biol.Chem., in press, 2003)。HCV複製の阻害剤開発の新たなデザインとして、NS5Bのオリゴマー化、NS5Aとの相互作用、及びヌクレオリン結合領域が標的となる可能性を示唆した。今後HCVレプリコン系を用いたHCV複製の効果の比較が必要である。

報告書

(4件)
  • 2002 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2001 実績報告書
  • 2000 実績報告書
  • 研究成果

    (51件)

すべて その他

すべて 文献書誌 (51件)

  • [文献書誌] S-W.Kee, et al.: "Human Hepatitis B Virus X protein is a possible mediator of hypoxia induced angiogenesis in hepatocellular carcinoma"Biochem.Res.Communs.. 268. 456-461 (2000)

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      「研究成果報告書概要(和文)」より
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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K.Masutomi, et al.: "Telomerase Activity Reconstituted in Vitro with Purified Human Telomerase Reverse Transcriptase and Human Telomerase RNA Component"J.Biol.Chem.. 275. 22568-22573 (2000)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Dorjsuren, D., et al.: "B型肝炎ウイルス(HBV)Xタンパクに拮抗する新規タンパクRMP"実験医学. 18. 1137-1141 (2000)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 増富健吉: "昆虫細胞発現系を用いたヒトテロメアーゼ逆転写酵素(hTERT)の発現・精製"バイオインダストリー. 17. 35-42 (2000)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Qin, W., et al.: "Mutational Analysis of the Structure and Functions of Hepatitis C Virus RNA-dependent RNA polymerase"Hepatol.. 33. 728-737 (2001)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Wei, W., et al.: "Direct interaction between the subunit RAP30 of TFIIF and RNA polymerase subunit 5(RPB5) which contributes to the association between TFIIF and RNA polymerase II"J.Biol.Chem.. 276. 12266-12273 (2001)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Murakami, S.: "Hepatitis B Virus X protein : A multifunctional regulatory protein"J Gastroenterol. 36. 651-660 (2001)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 村上清史: "ヒトテロメラーゼ逆転写酵素(hTERT)の発現・精製とヒトテロメラーゼ活性の試験管内の再構成(前)"教育通信. 23. 24-25 (2001)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] 村上清史: "ヒトテロメラーゼ逆転写酵素(hTERT)の発現・精製とヒトテロメラーゼ活性の試験管内の再構成(後)"教育通信. 24. 22-23 (2001)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Qin, W., et al.: "Oligomeric interaction of Hepatitis C Virus NS5B is critical for catalytic activity of RNA dependent RNA polymerase"J.Biol.Chem.. 277. 2132-2137 (2002)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Arai, K., et al.: "Two independent regions of human telomerase reverse transcriptase(hTERT) are important for their oligomerization and telomerase activity"J.Biol.Chem.. 277. 8536-8544 (2002)

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  • [文献書誌] Shirota, Y., et al.: "Hepatitis C Virus NS5A Binds RNA-Dependent RNA Polymerase NS5B and modulates RdRP activity"J.Biol.Chem.. 277. 11149-11155 (2002)

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  • [文献書誌] Masutomi, K., et al.: "Identification of serum anti_human telomerase reverse transcriptase(hTEPt) auto-antibodies during progression to hepatocellular carcinoma"Oncogene. 21. 5946-5950 (2002)

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  • [文献書誌] Maida, C., et al.: "Direct activation of telomerase by EGF through Ets-mediated transactivation of TERT via MAP kinase signaling pathway"Oncogene. 21. 4071-4079 (2002)

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  • [文献書誌] Hayashi, N., Murakami, S.: "STM1, a gene which encods a guanine quadruplex binding protein interacts with CDC13 in Saccharomyces cerevisiae"Mol.Genet.Genomics. 267. 806-813 (2002)

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  • [文献書誌] Hirano, M., et al.: "Direct Interaction between Nucleolin and Hepatitis C Virus NS5B"J.Biol.Chem.. 278. 5109-5115 (2003)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] S.W. Kee et al.: "Human Hepatitis B Virus X protein is a possible Mediator of hypoxia induced anglogenesis in hepatocellular carcinoma."Biochem. Res. Communs.. 268. 456-461 (2000)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K. Masutomi et al.: "Telomerase Activity Reconstituted in Vitro with Purified Human Telomerase Reverse Transcriptase and Human Telomerase RNA Component."J. Biol. Chem.. 275-29. 22568-22573 (2000)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] D. Dorjsuren et al.: "A novel protein, RMP, which functionally counteracts"Experimental Medicine. 18. 1137-1141 (2000)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K. Masutomi et al.: "Expression and Purification Method of Human Telomerase Reverse Transcriptase with Baculovirus Expresssion System"Bio Industry. 17. 35-42 (2000)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] W. Qin et al.: "Mutational Analysis of the Structure and Functions of Hepatitis C Virus RNA-dependent RNA polymerase."Hepatol.. 33. 728-737 (2001)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] W. Wei et al.: "Direct interaction between the subunit RAP30 of TFIIF and RNA Polymerase subunit 5(RPB5) which contributes to the association Between TFIIF and RNA polymerase II."J. Biol. Chem.. 276-15. 12266-12273 (2001)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] S. Murakami: "Hepatitis B Virus X proteimA multifunctional regulatory protein."J. Gastroenterol.. 36. 651-660 (2001)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] W. Qin et al.: "Oligomeric interaction of Hepatitis C Virus NS5B is critical for catalytic Activity of RNA dependent RNA polymerase."J. Biol. Chem.. 277-3. 2132-2137 (2002)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K. Arai et al.: "Two independent regions of human telomerase reverse transcriptase (hTERT) are important for their oligomerization and telomerase activity."J. Biol. Chem.. 277-10. 8536-8544 (2002)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Y. Shirota et al.: "Hepatitis C Virus NS5A Bind RNA-Dependent RNA Polymerase NS5B and modulates RdRP activity."J. Biol. Chem.. 277-13. 11149-11155 (2002)

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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] K. Masutomi et al.: "Identification of serum anti-human telomerase reverse Transcriptase (hTERT) auto-antibodies during progression to hepato-cellular carcinoma."Oncogene. 21. 5946-5950 (2002)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] C. Maida et al.: "Direct activation of telomerase by EGF through Ets-mediated transactivation of TERT via MAP kinase signaling pathway."Oncogene. 21. 4071-4079 (2002)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] N. Hayashi et al.: "STM1, a gene which encodes a guanine quadruplex binding protein interacts with CDC13 in Saccharomycec cerevisiae"Mol. Genet. Genomics.. 267. 806-813 (2002)

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      「研究成果報告書概要(欧文)」より
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      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] M. Harano et al.: "Direct Interaction between Nucleoin and Hepatitis C Virus NS5B"J. Biol. Chem.. 278-7. 5109-5115 (2003)

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    • 関連する報告書
      2002 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Qin, W., et al.: "Oligomeric interaction of Hepatitis. C Virus NS5B is critical for catalytic activity of RNA dependent RNA polymerase"J.Biol.Chem.. 277. 2132-2137 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Arai, K., et al.: "Two independent regions of human telomerase reverse transcriptase (hTERT) are important for their oligomerization and telomerase activity"J.Biol.Chem.. 277. 8536-8544 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Shirota, Y. et al.: "Hepatitis C Virus NS5A Binds RNA-Dependent RNA Polymerase NS5B and modulates RdRP activity"J.Biol.Chem.. 277. 11149-11155 (2002)

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      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Masutomi, K., et al.: "Identification of serum anti human telomerase reverse transcriptase (hTERT) auto-antibodies during progression to hepatocellular carcinoma"Oncogene. 21. 5946-5950 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Maida, C., et al.: "Direct activation of telomerase by EGF through Ets-mediated transactivation of TERT via MAP kinase signaling pathway"Oncogene. 21. 4071-4079 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Hayashi, N., Murakami, S.: "STM1, a gene which encods a guanine quadruplex binding protein interacts with CDC13 in Saccharomyces cerevisiae"Mol.Genet.Genomics. 267. 806-813 (2002)

    • 関連する報告書
      2002 実績報告書
  • [文献書誌] Qin, W., et al.: "Mutational Analysis of the Structure and Functions of Hepatitis C Virus RNA-dependent RNA polymerase"Hepatol.. 33. 728-737 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Wei, W., et al.: "Direct interaction between the subunit RAP of TFIIF and RNA polymerase subunit 5(RPB5)which contributes to the association between TFIIF and RNA polymerase II"J. Biol. Chem.. 276. 12266-12273 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Murakami, S.: "Hepatitis B Virus X protein : A multifunctional regulatory protein"J Gastroenterol. 36. 651-660 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] 村上清史: "ヒトテロメラーゼ逆転写酵素(hTERT)の発現・精製とヒトテロメラーゼ活性の試験管内の再構成(前)"教育通信. 23. 24-25 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] 村上清史: "ヒトテロメラーゼ逆転写酵素(hTERT)の発現・精製とヒトテロメラーゼ活性の試験管内の再構成(後)"教育通信. 24. 22-23 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Qin, W., et al.: "Oligomeric interaction of Hepatitis C Virus NS5B is critical for catalytic activity of RNA dependent RNA polymerase"J. Biol. Chem.. 277. 2132-2137 (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Arai, K., et al.: "Two independent regions of human telomerase reverse transcriptase(hTERT) are important for their oligomerization and telomerase activity"J. Biol. Chem.. (In press ). (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Shirota, Y. et al.: "Hepatitis C Virus NS5A Binds RNA-Dependent RNA polymerase BS5B and modulates RdRP activity"J. Biol. Chem.. (In press). (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] S.W.Kee, et al.: "Human Hepatitis B Virus X protein is a possible mediator of hypoxia induced angiogenesis in hepatocellular carcinoma."Biochem.Res.Communs.. 268. 456-461 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] K.Masutomi, et.al,.: "Teromerase Activity Reconstituted in Vitro with Purified Human Teromerase Reverse Transcriptase and Human Teromerase RNA Component."J.Biol.Chem.. 275. 22568-22573 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Qin,W., et al.: "Mutational Analysisof the Structure and Functions of Hepatitis C Virus RNA-dependent RNA polymerase."Hepatol.. (in press). (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Wei,W. et al.: "Direct interaction between the subunit RAP30 of TFIIF and RNA polymeras subunit5 (RPB5) which contributes to the association between TFIIF and RNA polymerase II."J.Biol.Chem. (in press). (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Dorjsuren,D., et al.: "B型肝炎ウイルス(HBV)Xタンパクに拮抗する新規タンパクRMP。"実験医学. 18. 1137-1141 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] 増富健吉: "昆虫細胞発現系を用いたヒトテロメアーゼ逆転写酵素(hTERT)の発現・精製。"バイオインダストリー. 17. 35-42 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] 村上清史: "ヒトテロメアーゼ逆転写酵素(hTERT)の発現・精製とヒトテロメアーゼ活性の試験管内の再構成。"教育通信. (印刷中). (2001)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書

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公開日: 2000-04-01   更新日: 2016-04-21  

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