| 研究課題/領域番号 |
12660275
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
基礎獣医学・基礎畜産学
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| 研究機関 | 大阪府立大学 |
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研究代表者 |
津山 伸吾 大阪府立大学, 農学生命科学研究科, 教授 (00094508)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
4,000千円 (直接経費: 4,000千円)
2001年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
2000年度: 2,900千円 (直接経費: 2,900千円)
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| キーワード | 一酸化窒素 / モノクローナル抗体 / 可溶性グアニル酸シグラーゼ / 可溶性グアニル酸シクラーゼ / 可溶性グアニレートサイクラーゼ / NO-センサー |
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| 研究概要 |
一酸化窒素(NO)は唯一の標的タンパク質である可溶性グアニレートサイクラーゼ(sGC)のbeta-subunitのHis-105に結合するhemeに結合し、その活性を100倍以上に上げる。しかし、hemeは一酸化炭素(CO)にも結合し数倍の活性上昇を招く。著者が作成した、モノクローナル抗体mAb3221はNO-sGC複合体には結合能が高いが、CO-sGCには低い、しかし近年sGCの活性化試薬として知られてきたYC-1は単独では10倍程度のsGCの活性化だが、COと共存させるとおよそNOと同程度の活性化がみられることが解って来た。この際のmAb3221の結合親和性はNO単独の場合と変わらなかった。従って、YC-1のような薬剤が存在する場合にはNOをsGCに捕捉し、これを抗体mAb3221で検出することに問題が生じることになる。しかし、hemeoxigenaseから産生するCOと一酸化窒素合成酵素が産生するNOだけの存在では本抗体を用いてNOを検出することは可能であった。又、昆虫細胞を用いたsGCの発現タンパク質はNOで約200倍の活性上昇が認められ、牛肺のsGCよりその活性化が高いことから、NOの検出に昆虫細胞の発現タンパク質を用いれば、より高感度のNO検出が可能であることが解った。この原因は牛肺にはhemeが結合出来ないbeta-subunitのスプライシング産物があることが原因であると考えられる。
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