研究概要 |
本研究では疾患時における急性期糖蛋白の糖鎖構造の質的変動を解析することを目的として,牛α1酸性糖蛋白(α1AGP)に対するモノクロナル抗体(Mab)の作製,L-selectin(L-sel)の遺伝子クローニングと蛋白発現,糖鎖構造の解析,リンパ球に対する機能解析を行なった. 1.モノクローナル抗体の作製:健常牛および白血病牛血清からα1AGPを分離し,これを抗原としてマウスを用いてMabを作製し,3つのクローン(IgM class,κ鎖)が得られ,Western blot法で牛α1AGPを認識した.また,本Mabは糖鎖を除去したα1AGPを認識せず,糖鎖結合領域.のepitopeを認識するものと考えられた.これを用いたELISAでは約0.1-10μgの範囲で測定可能であった. 2.牛L-selectinの遺伝子クローニングと蛋白発現:牛L-selをコードするcDNAをクローニングした.そのORFは1110bpで370aaをコードしていた.また,大腸菌発現では不溶性となったが,バキュロウイルス発現系では膜蛋白として発現し,抗体と良好な反応性を示した. 3.糖鎖構造の解析:Con Aに対するα1AGP糖鎖結合能は,正常牛では強い結合能を示す2分画しか認められないのに対し,白血病牛では第2分画の上昇とより結合能の低い第3分画,全く示さない第4分画が認められた.またSialyl Lewis X抗体との反応性は弱いものの,白血病牛ではやや上昇する可能性が示され,E-selectinとの結合性についても同様であった. 4.リンパ球の機能解析:牛リンパ球におけるサイトカインmRNA発現について検討した.ConA刺激ではIL-2は個体により異なる反応性を示したが,個体差はあるもののIL-4の低下およびIFN-γの上昇が観察され,これらの個体におけるα1AGPに差がみられた.
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