P型ATPase高次構造形成過程の解析と補助因子の検索

• 研究課題/領域番号: 12670041
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 生理学一般
• 研究機関: 九州工業大学
• 研究代表者: 野口 俊介 九州工業大学, 情報工学部, 助手 (30222194)
• 研究期間 (年度): 2000 – 2002
• 研究課題ステータス: 完了 (2002年度)
• 配分額: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円); 2002年度: 700千円 (直接経費: 700千円); 2001年度: 700千円 (直接経費: 700千円); 2000年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
• キーワード: Ca-ATPase / (Na,K)ATPase / (H,K)ATPase / βサブユニット / 生合成 / アフリカツメガエル卵母細胞 / 発現系 / (Na, K)ATPase / (H, K)ATPase

研究概要

生合成初期過程の詳細な解析を行った結果
1)Ca-ATPaseも生合成の極く初期には,(Na,K)ATPaseのβサブユニットと相互作用する.
2)Ca-ATPase-(Na,K)ATPaseβサブユニット複合体は一過性であり数時間で解離する.
3)(H,K)ATPaseβサブユニットも(Na,K)ATPaseβサブユニットと同様に生合成の初期においてCa-ATPaseと相互作用する.
ということを明らかにすることができた.これらからCa-ATPaseでも立体構造形成過程にβサブユニット様の補助因子が介在する可能性が予想された.そこでこのような補助因子が実際に存在するか検討を行った.Xenopus母細胞より調製した膜画分,可溶性画分をSDS-PAGE,膜転写し抗(Na,K)ATPaseβサブユニット抗体,抗(H,K)ATPaseβサブユニットモノクローナル抗体で免疫染色すると両者に共通して反応する約60kDaのバンドが検出された.このバンドは(Na,K)ATPaseβサブユニットモノクローナル抗体では検出されなかった.あらかじめCa-ATPase cRNAを注射しておいた卵母細胞にこれら3種の抗体を注射したところ抗(Na,K)ATPaseβサブユニット抗体,抗(H,K)ATPaseβサブユニットモノクローナル抗体ではCa-ATPaseの生合成の抑制が見られたが,60kDa蛋白と反応しない(Na,K)ATPaseβサブユニットモノクローナル抗体では抑制は見られなかった.これらの結果はこの60kDa蛋白がXenopus卵母細胞発現系におけるCa-ATPaseの生合成に関与している可能性を示唆している.そこでこの60kDa蛋白を同定すべく精製を行った.Xenopus卵巣より可溶性画分を調製し,クロマトグラフィーにより分画して粗精製標品を得た.これをSDS-PAGE,膜転写し60kDa蛋白のバンドを切り抜きアミノ酸配列決定を行ったが,N末端がブロックされていたため配列情報は得られなかった.

研究成果

• [文献書誌] Noguchi, S.: "The transient association of the sarcoplasmic reticulum Ca^<2+>-ATPase with the Na^+/K^+-ATPase and H^+/K^+-ATPase β-subunits during its biogenesis in Xenopus oocytes"Journal of Cell Science. 116. 1875-1880 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Noguchi, S.: "Subunit interaction in the early stage of biogenesis of Na, K-ATPase In Taniguchi, K.and Kaya, S.(eds.), Na/K-ATPase And Related ATPase, pp.537-542"Elsevier Science B.V.(Amsterdam, The Netherlands). 771 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Noguchi,S.: "The transient association of the sarcoplasmic reticulum Ca^<2+>-ATPase with the Na^+/K^+-ATPase and H^+/K^+-ATPase β-subunits during its biogenesis in Xenopus oocytes"Journal of Cell Science. 116. 1875-1880 (2003)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Noguchi,S., In Taniguchi, K. and Kaya, S.(eds.): "Subunit interaction in the early stage of biogenesis of Na,K-ATPase, Na/K-ATPase and Related ATPase,"Elsevier Science B. V.. 537-542 (2000)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Noguchi, S.: "The transient association of the sarcoplasmic reticulum Ca^<2+>-ATPase with the Na^+/K^+-ATPase and H^+/K^+-ATPase β-subunits during its biogenesis in Xenopus oocytes"Journal of Cell Science. (in press). (2003)
• [文献書誌] Noguchi,S.: "Subunit interaction in the early stage of biogenesis of Na, K-ATPase In Taniguchi, K.and Kaya, S. (eds.), Na/K-ATPase and Related ATPase, pp.537-542."Elsevier Science B.V. (Amsterdam, The Netherlands). 771 (2000)