センダイウイルス発現組換gp120を用いた新規HIV-1サブタイピング技術の開発

• 研究課題/領域番号: 12670288
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: 国立感染症研究所
• 研究代表者: 武部 豊 国立感染症研究所, エイズ研究センター第1室, 室長 (50126116)
• 研究期間 (年度): 2000 – 2001
• 研究課題ステータス: 完了 (2001年度)
• 配分額: 3,400千円 (直接経費: 3,400千円); 2001年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円); 2000年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
• キーワード: HIV-1サブタイプ / HIV-1エンベロープ / センダイウイルスベクター / ElA / 血清学的サブタイピング / HIV-1エンベロープタンパク質 / EIA / ELISA

研究概要

HIV-1サブタイプA-Eのエンベロープタンパク質gp120発現用センダイウイルスベクターを開発した。
発現量を簡便に評価するため、エンベロープタンパク質のC-末ペプチドに対する精製ポリクローナル血清を一次抗体、感染者のプール血清を二次抗体とするEIA(enzyme immunoassay)系を開発した。
この定量システムを用いることによって、コドン選択をヒト型に適正化する(codon optimization)こと、およびCD5遺伝子のリーダー配列(分泌シグナル)を用いた発現量の増強効果をサブタイプBおよぴサブタイプCエンペロープタンパク質を用いて評価した。その結果、codon optimizationによって約1.5-2倍、それに加えてCD5リーダー配列を付加することによって約2-3倍の発現量の増強が得られることを示した。
センダイウイルスベクターによって産生された各サブタイプの組換えエンペロープgp120タンパク質を用いたEIAによって、サブタイプE, B間を高感度にまた高い特異性をもって区別できるが、他のサブタイプについては交叉反応性が高く血清学的なサブタイピングが必ずしもうまくいかないことが明らかになった

研究成果

• [文献書誌] Toriyoshi, H.Shioda, T., Sato, H., Sakaguchi, M., Eda, Y., Tokiyoshi, S., Kato, K., Nohtomi, K., Kusagawa, S., Taniguchi, K., Shiino, T., Kato, A., Foongladda, S., Linkanonsakul, S., Oka, S., Iwamoto, I., Wasi, C., Nagai, Y., Takebe, Y.: "Sendai virus based production of HIV-1 subtype B and subtype E gp120 antigens and their use for highly sensitive detection of subtype-specific serum antibodies"AIDS Res and Human Retroviruses. 15. 1109-1120 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [文献書誌] Toriyoshi, H. Shioda, T., Sato, H., Sakaguchi, M., Eda, Y., Tokiyoshi, S., Kato, K., Nohtomi, K., Kusagawa, S., Taniguchi, K., Shiino, T., Kato, A., Foongladda, S., Linkanonsakul, S., Oka, S., Iwamoto, L, Wasi, C., Nagai, Y., and Takebe, Y.: "Sendai virus based production of HIV-1 subtype B and subtype E gp120 antigens and their use for highly sensitive detection of subtype-specific serum antibodies"AIDS Res and Human Retroviruses. 15. 1109-1120 (1999)
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [文献書誌] Toriyoshi, H., Shioda, T., Sato, H., Takebe, Y., et al.: "Sendal virus based production of HIV-1 subtype B and subtype E gp12O antigens and their use for highly sensitive detection of subtype-specific serum antibodies"AIDS Research and Human Retroviruses. 15. 1109-1120 (1999)
• [文献書誌] Toriyoshi,H.,Shioda,T.,Sato,H.,Takebe,Y., et al.: "Sendai virus based production of HIV-1 subtype B and subtype E gp120 antigens and their use for highly sensitive detection of subtype-specific serum antibodies."AIDS Research and Human Retroviruses.. 15. 1109-1120 (1999)
• [文献書誌] Motomura,K.,Kusagawa,Kato,K.,Takebe,Y., et al.: "Emergence of new forms of human immunodeficiency virus type 1 intersubtype recombinants in Central Myanmar."AIDS Research and Human Retroviruses.. 16. 1831-1843 (2000)
• [文献書誌] Kato,K.,Kusagawa,S.,Motomura,K.,Takebe.Y., et al.: "Closely related HIV-1 CRF01_AE variants among injecting drug users in northem Vietnam : Evidence of HIV spread across the Vietnam-China border"AIDS Research and Human Retroviruses. 17. 113-123 (2001)