| 研究課題/領域番号 |
12670372
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
公衆衛生学・健康科学
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| 研究機関 | 川崎医科大学 |
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研究代表者 |
勝山 博信 川崎医科大学, 医学部, 講師 (00289175)
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| 研究分担者 |
井出口 清治 (井手口 清治) 川崎医科大学, 医学部, 助教授 (70168334)
福永 仁夫 川崎医科大学, 医学部, 教授 (00093302)
角南 重夫 川崎医科大学, 医学部, 教授 (20069040)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
2001年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
2000年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
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| キーワード | ビタミンK_2 / osteocalcin / RANK / RANKL / osteoprotegerin / real time PCR / SSH / RT-PCR |
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| 研究概要 |
脂溶性ビタミンであるvitamin K_2は骨芽細胞の核内に結合蛋白の存在することが指摘されている。vitamin K_2の作用を明らかにするためにマウスの骨芽細胞であるMC3T3E1細胞に種々の濃度のvitamin K_2を投与し、生理機能を解析した。vitamin K_2は従来の報告にあるように10^<-7>Mから10^<-5>Mまでを投与し、vitamin K_2の単独投与だけでなく活性型vitamin Dとの併用による効果も検討した。細胞数の変化では、vitamin K_2単独投与だけでなくvitamin K_2に活性型vitamin Dを加えた培養細胞において、細胞数の増加を認めた。次にMC3T3E1細胞の放出するosteocalcin、receptor activator of NFκB(RANK)、RANK ligand(RANKL)、osteoprotegerinなどのcytokinesに対するvitamin K_2の効果をmRNAレベルで解析した。これらのcytokinesのmRNAはvitamin K_2 10^<-6>M添加により培養開始1時間後から6時間後で増加した。活性型vitamin Dの共存下でも同様の傾向を示した。vitamin K_2の効果は10^<-6>Mで最も生理活性が高くなり、直接細胞に作用していると考えられた。次にどのような因子がmRNAの発現に影響しているかを明らかにするために、suppression subtractive hybridization法(SSH)を用いて探索した。この方法はvitamin K_2とcontrolの間で発現量に差のあるmRNAの同定を行なうもので、両者に同程度に存在する遺伝子は排除され、発現量に差のあるcDNAだけが選択的かつ指数関数的に増幅される。この方法により、tenascin、lumicanなどの遺伝子を同定することができた。今後、さらに発現量に差のある遺伝子を同定し、その機能を明らかにしていく必要がある。
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