| 研究課題/領域番号 |
12670458
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
消化器内科学
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
横須賀 收 千葉大学, 大学院・医学研究院, 講師 (90182691)
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| 研究分担者 |
今関 文夫 千葉大学, 大学院・医学研究院, 講師 (40223325)
藤原 慶一 千葉大学, 医学部・附属病院, 医員
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
2001年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
2000年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
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| キーワード | A型肝炎 / A型肝炎ウイルス / 非構造蛋白 / シグナル伝達 / HAV-VP3 / SRE / ルシフェラーゼアッセイ / 構造蛋白 / ルシフェラーゼ アッセイ / 急性肝炎 / アポトーシス / 弱毒化ウイルス / 劇症肝炎 |
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| 研究概要 |
A型肝炎ウイルス感染は未だに重要な社会問題である。このウイルス感染症は明らかなCytopathic Effectを示さず、現在までに宿主細胞内輸送系および合成系に影響を及ぼすとの報告はない。近年B型およびC型肝炎ウイルス感染症では、それぞれHBx蛋白、HCVコア蛋白により、宿主細胞内シグナル伝達系に重大な影響を及ぼすことが報告されている。そこで我々はA型肝炎ウイルス蛋白の宿主細胞内シグナル伝達系に対する影響を検討するため、9つのA型肝炎ウィルス蛋白を発現するプラスミド(FLAG-HAV VP2、VP3、VP1-2A、2B、2C、3A、3BC、3C、3D)を作成した。これらを用いて以下に記す5つの代表的な細胞内シグナル伝達系に対する影響を検討した。
A型肝炎ウイルス蛋白発現プラスミドをそれぞれCyclic AMP response element(CRE)、Serum response factor(SRF)、Activator protein1(AP-1)、Nuclear factor kB(NF-KB)、およびSerum response element(SRE)結合配列の下流にルシフェラーゼ遺伝子をもつレポータープラスミドと同時にHeLa細胞内へ遺伝子導入した。42時間後細胞を回収し、ルシフェラーゼアッセイを行い各細胞内シグナル伝達系に対する影響を検討した。
ルシフェラーゼアッセイは少なくとも3回行った。ウイルス蛋白がコントロールに比して2倍以上活性化した場合を有意と定義すると、HAV-VP3蛋白はSRE関連シグナル伝達経路を2.2±0.3倍活性化した。しかし、CRE-(1.1±0.1)、SRF-(1.6±0.2)、AP-1-(1.1±0.1)、およびNF-KB-(0.7±0.1)関連シグナル伝達経路には影響がみられなかった。その他の蛋白はCRE-、SRF-、AP-1-、NF-KB-、およびNF-KB-関連シグナル伝達経路に明らかな影響を与えなかった。この結果、HAV-VP3蛋白が細胞増殖分化に重要なSRE関連シグナル伝達経路を活性化している可能性が示唆された。
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