| 研究課題/領域番号 |
12670620
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
神経内科学
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| 研究機関 | 東京女子医科大学 |
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研究代表者 |
橋本 しをり 東京女子医科大学, 医学部, 助手 (60180824)
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| 研究期間 (年度) |
2000 – 2001
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| 研究課題ステータス |
完了 (2001年度)
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| 配分額 *注記 |
1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
2001年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
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| キーワード | 免疫グロブリン / 自己免疫疾患 / 腫瘍随伴神経筋疾患 / 自己免疫 |
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| 研究概要 |
自己抗体遺伝子の可変領域のsomatic mutationを解析することで、自己抗体産生におけるantigen-drivenの有無を判別することが可能である。本研究では、末梢単核球をB細胞マーカーおよび蛍光標識した自己抗原とで2重染色した後に、フローサイトメーターで自己抗体産生B細胞を検出・回収し、自己反応性B細胞の免疫グロブリン遺伝子の解析を試みた。神経筋接合部障害をきたす腫瘍随伴症候群として、Lambert-Eaton症候群や重症筋無力症(MG)がある。MGでは、後シナプス膜にあるアセチルコリン受容体(AchR)に対する自己抗体が出現する。AchRは複数のサブユニットからなるため、本研究では精神神経ループスの自己抗原であるリボゾームP抗原などを用いて、自己抗体産生B細胞の同定を試みた。免疫グロブリン遺伝子の解析に関しては、全末梢単核球からRNAを抽出した場合、VH1-6のそれぞれに特異的なプライマーと各免疫グロブリンアイソタイプの特異プライマーとを用いてRT-PCR法を行い、VH1-6のCDR3領域を含む全長を増幅し、シークエンスすることが可能であった。しかし、複数の自己抗原を用いて染色実験を行ったが、自己抗体産生B細胞の回収は困難であった。フローサイトメーターの検出感度をあげるために、tyramideラジカルの生成を利用した蛍光シグナル増幅法を用いても、回収は困難であった。自己免疫疾患における自己抗体産生B細胞の頻度は極めて少ないと考えられる。
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