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高比重リポ蛋白(HDL)による末梢細胞からのコレステロール引抜きの分子機構の解明

研究課題

研究課題/領域番号 12670666
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 循環器内科学
研究機関大阪大学

研究代表者

酒井 尚彦  大阪大学, 医学系研究科, 助手 (80294073)

研究分担者 平野 賢一  大阪大学, 医学系研究科, 助手 (30332737)
山下 静也  大阪大学, 医学系研究科, 助教授 (60243242)
西田 誠  大阪大学, 医学部・附属病院, 医員
研究期間 (年度) 2000 – 2001
研究課題ステータス 完了 (2001年度)
配分額 *注記
3,900千円 (直接経費: 3,900千円)
2001年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
2000年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
キーワード動脈硬化 / コレステロール逆転送 / HDL受容体 / マクロファージ / GPI-anchor蛋白 / コレステロールエフラックス / 高比重リポ蛋白(HDL) / moesin
研究概要

我々は、リガンドブロティングによってヒト単球由来マクロファージ(MΦ)においてHDLに特異的に結合し、MΦからのeffluxに関与するHDL結合蛋白の存在を明らかにした。この分子量80KDaの蛋白はMΦにコレステロール負荷することによって誘導される細胞膜表面のHDL受容体であり、コレステロールに富む細胞膜分画Detergent Resistant Membrane(DRM)に局在するGPI-anchor型HDL結合蛋白である。PI-PLCにて処理した単層培養MΦの培養上清よりHDLアフィニティカラムを用いて精製した蛋白をエンドペプチダーゼ処理し、フラグメントのアミノ酸配列を決定すると、ヒトmoesinの内部配列と一致した。これまで、moesinは細胞膜の細胞質側に存在し、またGPI-anchor型蛋白でもないことが報告されているが、moesinに対する抗体はこのmoesin様GPI-anchor型HDL結合蛋白を認識することを確認した。次にこの抗moesin抗体を用いてMΦを前処理するとHDLおよびapoA-IのMΦに対する結合が阻害され、それに引き続くコレステロール引き抜きも抑制された。また、抗moesin抗体を用いたMΦの膜蛋白の二次元電気泳動と免疫組織化学的検索によって、このmoesin様HDL結合蛋白が実際に細胞膜表面に発現していることを確認した。さらにmoesin様HDL結合蛋白はMΦに特異的に発現され、MΦの分化およびコレステロール負荷によって発現が誘導された。以上のことからこの新しく発見したmoesin様HDL結合蛋白は細胞表面に存在し、コレステロール引き抜きに関与するGPI-anchor型のHDL結合蛋白であることが示された。今後、MΦのcDNAライブラリーをスクリーニングして、cDNAをクローニングしmoesinとの同一性およびさらなる機能・構造の解析を行う。

報告書

(3件)
  • 2001 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2000 実績報告書
  • 研究成果

    (29件)

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すべて 文献書誌 (29件)

  • [文献書誌] Sakai N, et al.: "A large scale isolation of shear stress-responsive genes from cultured human endothelial cells by preparation of a subtracted cDNA library"Atherosclerosis. (in press).

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  • [文献書誌] Sakai N, et al.: "Decreased microsomal triglyceride transfer protein activity contributes to initiation of alcoholic liver steatosis in rats"J Hepatol. 36. 157-162 (2002)

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  • [文献書誌] Sakai N, et al.: "Expression and functional analyses of novel mutation in ATP-binding cassette transporter-1 in Japanese patients with high density lipoprotein deficiency"Biochem Biophys Res Commun. 290. 713-721 (2002)

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  • [文献書誌] Lambert G, Sakai N, et al.: "Analysis of glomerulosclerosis and atherosclerosis in lecithin cholesterol acyltransferase deficient mice"J Biol Chem. 276. 15090-15098 (2001)

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  • [文献書誌] Sakai N, et al.: "Expression or cholestery Tester transfer protein in human atherosclerotic lesions and its implication in reverse cholesterol transport"Atherosclerosis. 159. 67-75 (2001)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sakai N, et al.: "Characterization and puritication of GPI-anchored type HDL-binding protein on human monocyte-derived macrophages. Biochem Biophys Res Commun"Biochem Biophys Res Commun. 272. 864-871 (2000)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Matsuyama A, et al: "Characterization and purification of a GPI-anchored type HDL-binding protein on human monocyte-derived macrophages"Biochem Biophys Res Commun. 272. 864-871 (2000)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Komuro R, et al: "Tangier disease with continuously massive and longitudinal diffuse calcification in the coronary arteries. Demonstration by the sagittal images of intravascularultrasoijography-"Circulation. 101. 2446-2448 (2000)

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  • [文献書誌] Hiranjo K, et al: "Decreased expression of a member RhoGTPases family, Cdc42Hs, in cells from Tangier disease. The small G protein may play a role in cholesterol efflux from the cells"FEBS letters. 484. 275-279 (2000)

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  • [文献書誌] Yamashita S, et al: "Molecular mechanisms, lipoprotein abnormalities and atherogenicity of hyperalphalipoproteinemia"Atherosclerosis. 152. 271-285 (2000)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yamashita S, et al: "Molecular biology and pathophysiological aspects of plasma cholesteryl ester transfer protein"Biochim Biophys Acta. 1529. 257-275 (2000)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] lambert G, Sakai N, et al: "Analysis of glomerulosclerosis and atherosclerosis in lecithin cholesterol acyltransferase deficient mice"J Biol Chem. 276. 15090-15098 (2001)

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  • [文献書誌] Zhang Z, et al: "Expression of cholesteryl ester transfer protein in human atherosclerotic lesions and its implication in reverse cholesterol transport"Atherosclerosis. 159. 67-75 (2001)

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  • [文献書誌] Hishida Y, et al: "Expression and functional analysis of novel mutations of ATP-binding cassette transporter- 1(ABCA1) in Japanese patients with high density lipoprotein deficiency"Biochem Biophys Res Commun. 290. 713-721 (2002)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sugimoto T, et al: "Decreased microsomal triglyceride transfer protein activity contributes to initiation of alcoholic liver steatosis in rats"J Hepatol. 36. 157-162 (2002)

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sakai N, et al.: "Lipoprotein metabolism and molecular pathogenesis of atherosclerosis"Adv Gerontol. (in press).

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Yoshisue H, et al: "A large scale isolation of shear stress-responsive genes from cultured human endothelial cells by preparation of a subtracted cDNA library"Atherosclerosis. (in press).

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      2001 研究成果報告書概要
  • [文献書誌] Sakai N, et al.: "A large scale isolation of shear stress-responsive genes from cultured human endothelial cells by preparation of a subtracted cDNA library"Atherosclerosis. (in press).

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Sakai N, et al.: "Decreased microsomal triglyceride transfer protein activity contributes to initiation of alcoholic liver steatosis in rats"J Hepatol. 36. 157-162 (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Sakai N, et al.: "Expression and functional analyses of novel mutation in ATP-binding cassette ransporter-1 in Japanese patients with high density lipoprotein deficiency"Biochem Biophys Res Commun. 290. 713-721 (2002)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Lambert G, Sakai N, et al.: "Analysis of glomeruloscierosis and atherosclerosis in lecithin cholesterol acyltransferase deficient mice"J Biol Chem. 276. 15090-15098 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Sakai N, et al.: "A point mutation (-69 G to A) in the promoter region of cholesteryl ester transfer protein gene in Japanese hyperalphalipoproteinomis subjects"Arterioscier Thromb Vasc Boil. 21. 985-990 (2001)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Sakai N, et al.: "Characterization and purification of a GPI-anchored type HDL-binding protein on human monocyte-derived macrophages. Biochem Biophys Res Commun"Biochem Biophys Res Commun. 272. 864-871 (2000)

    • 関連する報告書
      2001 実績報告書
  • [文献書誌] Lambert G,Sakai N, et al.: "Analysis of glomerulosclerosis and atherosclerosis in lecithin cholesterol acyltransferase deficient mice"J Biol Chem. (in press).

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Nagano M, et al.: "A point mutation (-69 G to A) in the promoter region of cholesteryl ester transfer protein gene in Japanese hyperalphalipoproteinemic subjects"Arterioscler Thromb Vasc Biol. (in press).

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Zhang E, et a;.: "Expression of cholesteryl ester transfer protein in human atherosclerotic lesions and its implication of the reverse cholesterol transport"Atherosclerosis. (in press).

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Miyaoka K,Kuwasako T, et al.: "CD36 deficiency associated with insulin resistance"Lancet. 357. 686-687 (2001)

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      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Matsuyama A, et al.: "Characterization and purification of a GPI-anchored type HDL-binding protein on human monocyte-derived macrophages. Biochem Biophys Res Commun"Biochem Biophys Res Commun. 272. 864-871 (2000)

    • 関連する報告書
      2000 実績報告書
  • [文献書誌] Hiranao K, et al.: "Decreased expression of a member RhoGTPase family, Cdc42Hs, in cells from Tangier disease. -The small G protein may play a role in cholesterol efflux from the cells"FEBS letter. 484. 275-279 (2000)

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      2000 実績報告書

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公開日: 2000-04-01   更新日: 2016-04-21  

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